[发明专利]具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法及应用

权利要求书

1.具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法，其特征是：包括如下步骤：

S1、shRNA-LeptinR质粒的构建：将合成的shRNA-LeptinR片段插入到质粒载体中获得重组质粒载体，然后再将所述重组质粒载体载体转化到大肠杆菌中，并提取获得shRNA-LeptinR质粒；

S2、巨噬细胞膜制备：

A.取对数生长期的M0型小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，待密度达到70％时，加入IL-4和IL-13，作用24h后，收集M2型巨噬细胞；

B.采用预冷的Tris-镁盐缓冲盐重悬细胞，然后通过微型挤出器反复挤出20次以破坏细胞，再采用蔗糖梯度离心法提取细胞膜；

S3、载基因纳米粒M2H@RPK的制备，采用静电吸附法制备纳米粒M2H@RPK，其具体步骤为：

a.将S1步骤中shRNA-LeptinR质粒与iRGD混合，静置5min，形成iRGD与shRNA-LeptinR质粒的共混物；再加入PEI和抗炎肽KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(KAFAK)，得到复合物RPK(KAFAK-iRGD-PEI-shRNA-LeptinR)，静置混合5min；

b.向复合物RPK中加入HA，混合均匀，并通过自组装得到纳米粒H@RPK(HA@KAFAK-iRGD-PEI-shRNA-LeptinR)；

c.以S2步骤中所提取的M2巨噬细胞膜包裹纳米粒H@RPK，采用微型挤出器反复过聚碳酸酯膜得纳米粒M2H@RPK，然后4℃保存并尽快使用。

2.根据权利要求1所述的具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法，其特征是：S1步骤中的shRNA构建引物的正向序列为5′-CACAAAGAAGTTACATCTT-3′；所述构建引物的反向序列为3′-AAGATGTAACTTCTTTGTG-5′。

3.根据权利要求1所述的具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法，其特征是：S3步骤中shRNA-LeptinR质粒：iRGD：PEI:KAFAK:HA的添加量的质量比为1：5：5：20：30。

4.根据权利要求1所述的具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法，其特征是：S3步骤中，M2细胞膜与shRNA-LeptinR质粒添加量的质量比为48：10。

5.根据权利要求1所述的具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法，其特征是：S3步骤中的聚碳酸酯膜的孔径为400nm。