[发明专利]甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒及扩增方法和应用

权利要求书

1.一种甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒，其特征在于，由特异性逆转录引物池、脱氧核糖核苷三磷酸混合物，逆转录缓冲液、二硫苏糖醇、RNA酶抑制剂、RNA逆转录酶、无核酸酶水、扩增酶预混液、PCR扩增引物池以及RNA酶组成，其中特异性逆转录引物池包括至少两特异性逆转录引物，PCR扩增引物池内包括至少两PCR扩增引物，每一特异性逆转录引物的序列内设有针对甲型流感病毒核酸的引入酶位点。

2.根据权利要求1所述的甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒，其特征在于，特异性逆转录引物池的特异性逆转录引物的序列中设有针对甲型流行病毒核酸的引入酶位点：ApaI以及EcoR。

3.根据权利要求1所述的甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒，其特征在于，特异性逆转录引物池包括针对甲型流感病毒8个片段的第一特异性逆转录引物、第二特异性逆转录引物以及第三特异性逆转录引物，其中第一特异性逆转录引物的序列为：GGGCCCAGCAAAAGCAGG；第二特异性逆转录引物的序列为：GGGCCCAGCGAAAGCAGG；其中第三特异性逆转录引物的序列为：GGAATTCCAGTAGAAACAAGG。

4.根据权利要求1所述的甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒，其特征在于，特异性逆转录引物和PCR扩增引物池的PCR扩增引物的序列相同。

5.根据权利要求3所述的甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒，其特征在于，特异性逆转录引物池的引物GC含量比控制在40-60％。

6.根据权利要求1到5任一所述的甲型流感病毒全基因组扩增试剂盒在非疾病诊断和治疗中的甲型流感病毒全基因组扩增方法，包括以下步骤：

获取甲型流感病毒的目标核酸；

反转录合成第一链cDNA：在PCR反应管中混合特异性逆转录引物池、脱氧核糖核苷三磷酸、无核酸酶水以及目标核酸后离心，适宜温度孵育一段时间后冷却得到退火产物；混合RNA逆转录酶、二硫苏糖醇、RNA酶抑制剂以及RNA逆转录酶得到预混液；在预混液中加入退火产物后依据设定的PCR程序进行反转录生成cDNA；

全基因组扩增：混合PCR扩增引物池、无核酸酶水、扩增酶预混液以及cDNA

后利用多重PCR程序进行扩增得到PCR产物，纯化PCR产物后得到扩增产物。