[发明专利]对目标核酸进行检测的方法

权利要求书

1.一种对目标核酸进行检测的方法，其具备以下工序：

(1)将第一核酸探针与试样混合，制备混合液的工序，

(2)对所述混合液的荧光强度进行测定的工序，和

(3)基于所述荧光强度、对所述目标核酸进行检测的工序；

其中，

(i)所述目标核酸具备所述第一核酸探针进行杂交的探针结合区域，

所述探针结合区域的至少一个末端为鸟嘌呤碱基、且在距离所述鸟嘌呤碱基为1～7个碱基以内的所述探针结合区域中存在1个以上的胞嘧啶碱基，

(ii)所述第一核酸探针具备末端具有与所述鸟嘌呤碱基相对的胞嘧啶碱基的寡核苷酸和结合在该胞嘧啶碱基上的荧光色素，

所述荧光色素是在与鸟嘌呤碱基的相互作用下发生消光的荧光色素，

所述寡核苷酸除了存在于距离所述末端鸟嘌呤碱基为1～7个碱基以内的胞嘧啶碱基之外、与所述探针结合区域的核酸互补，与该胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基是鸟嘌呤碱基或不具有所述荧光色素的荧光的消光作用的碱基，其中，与该胞嘧啶碱基中最靠近所述末端鸟嘌呤碱基的胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基是不具有所述荧光色素的荧光的消光作用的碱基，

(iii)通过使与最接近所述末端鸟嘌呤碱基的胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基为不具有所述荧光色素的荧光的消光作用的碱基，和与最接近所述末端鸟嘌呤碱基的胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基为鸟嘌呤碱基的情况相比，不与所述靶核酸杂交时的荧光强度的减少较小。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述检测通过熔解曲线分析进行。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述试样含有通过以受检核酸为模板的核酸扩增反应获得的扩增产物。

4.一种对目标核酸进行检测的方法，其具备以下工序：

(1)将第一核酸探针与含有受检核酸的试样混合，制备混合液的工序，

(2)以所述混合液中含有的受检核酸为模板进行核酸扩增反应，获得扩增产物的工序，所述扩增反应是包含反复进行变性阶段、退火阶段及延伸阶段的循环的聚合酶链反应，

(3)在所述退火阶段中对所述混合液的荧光强度进行测定的工序，和

(4)基于所述荧光强度对所述目标核酸进行检测的工序；

其中，

(i)所述目标核酸具备所述第一核酸探针进行杂交的探针结合区域，

所述探针结合区域的至少一个末端为鸟嘌呤碱基、且在距离所述鸟嘌呤碱基为1～7个碱基以内的所述探针结合区域中存在1个以上的胞嘧啶碱基，

(ii)所述第一核酸探针具备末端具有与所述鸟嘌呤碱基相对的胞嘧啶碱基的寡核苷酸和结合在该胞嘧啶碱基上的荧光色素，

所述荧光色素是在与鸟嘌呤碱基的相互作用下发生消光的荧光色素，

所述寡核苷酸除了存在于距离所述末端鸟嘌呤碱基为1～7个碱基以内的胞嘧啶碱基之外、与所述探针结合区域的核酸互补，与该胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基是鸟嘌呤碱基或不具有所述荧光色素的荧光的消光作用的碱基，其中，与该胞嘧啶碱基中最靠近所述末端鸟嘌呤碱基的胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基是不具有所述荧光色素的荧光的消光作用的碱基，

(iii)通过使与最接近所述末端鸟嘌呤碱基的胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基为不具有所述荧光色素的荧光的消光作用的碱基，和与最接近所述末端鸟嘌呤碱基的胞嘧啶碱基相对的所述寡核苷酸上的碱基为鸟嘌呤碱基的情况相比，不与所述靶核酸杂交时的荧光强度的减少较小。