[发明专利]以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法

权利要求书

1.一种以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

磁性淀粉纳米粒子的制备：向磁性Fe₃O₄纳米粒子水溶液中加入可溶性淀粉，于80~110°C下持续搅拌0.5~3.0 h后，冷却至室温得沉淀，经多次洗涤沉淀后冷冻干燥得磁性淀粉纳米粒子；

磁性淀粉纳米粒子固定化酶的制备：向所述磁性淀粉纳米粒子中加入磷酸缓冲液A和戊二醛，于室温下交联0.5~4.0 h后多次洗涤获得沉淀，然后加入磷酸缓冲液B及游离酶液，于20~55 °C固定化1.0~10.0 h，期间不停搅拌，固定化结束后将体系冷却至室温获取沉淀，冷冻干燥即得磁性淀粉纳米粒子固定化酶。

2.根据权利要求1所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述磁性Fe₃O₄纳米粒子与可溶性淀粉的质量比为6:1~2:1。

3. 根据权利要求1所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述磁性淀粉纳米粒子与磷酸缓冲液A的料液比为1:10~1:30 g/mL。

4. 根据权利要求1所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述游离酶液与磷酸缓冲液B的料液比为1:20~1:50 g/mL。

5.根据权利要求1所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述磁性Fe₃O₄纳米粒子的制备方法如下：

向装有去离子水的容器中通氮气20~60 min，按摩尔比1:2~1:0.5分别加入Fe²⁺及Fe³⁺，在温度为40~100 °C下不停搅拌直至溶解，向容器中滴加已通氮气20~60 min的NaOH溶液，并不停搅拌，当pH到达9~12时停止滴加，继续通氮气搅拌一段时间，待体系稳定后使反应体系冷却至室温，多次洗涤后获得沉淀，对其进行冷冻干燥即得所述磁性Fe₃O₄纳米粒子。

6. 根据权利要求5所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述NaOH溶液的摩尔浓度为1.0~3.0 mol/L。

7. 根据权利要求5所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述Fe²⁺来源于FeSO₄·7H₂O，所述Fe³⁺来源于FeCl₃·6H₂O。

8. 根据权利要求1至7中任一项所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述游离酶液中的酶为胰蛋白酶Trypsin，TRY或脂肪酶，所述脂肪酶为疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶Thermomyces lanuginosus lipase，TLL。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液A和磷酸缓冲液B的pH均为6.0~9.0；

所述戊二醛的浓度为0.5~4.0% v/v。

10.根据权利要求1至7中任一项所述的以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法，其特征在于，在磁性淀粉纳米粒子的制备过程中，所述多次洗涤沉淀的洗涤方式为用去离子水清洗；

在磁性淀粉纳米粒子固定化酶的制备过程中，所述多次洗涤沉淀的洗涤方式为用去离子水和相应pH的磷酸缓冲液交替清洗。