[发明专利]一种重组蛋白K-S及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组蛋白K‑S及其制备方法和应用，属于生物技术领域，方案包括在所述S1蛋白的核苷酸序列上，对6个关键位点进行突变，突变位点及碱基分别为：G1251T，T1355G，G1450C，A1501T，A1841G和C2042G，编码蛋白后相应的位点为：K417N，L452R，E484Q，N501Y，D614G和P681R；连接到真核表达载体pcDNA3.1中，利用CHO‑S细胞(ThermoFisher)进行表达后纯化得到重组蛋白K‑S，该重组蛋白K‑S可与灭活疫苗通过皮内序贯免疫新型冠状病毒变异株。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组蛋白K-S及其制备方法和应用。

背景技术

由SARS-Cov-2引起的COVID-19，在全球引起的大流行已经造成了超过了2亿次的感染和430余万死亡病例。这一趋势随着在全球不时出现的变异株大流行而进一步加剧，更加引起了人们的广泛关注和担忧。随着全球大流行，各种变异株不断出现，包括阿尔法、贝塔、伽玛、德尔塔和拉姆达等，还无法预料后续会出现何种新的变异株。所有已出现的变异株都具有两个共同特点，传染性和免疫逃逸力都显著增强。疫苗是预防和控制传染病最有效的途径，面对全球变异株大流行等复杂多变的趋势，疫苗接种仍然是最有效防控手段。面对疫情反扑等严峻形势，多国都准备在原来两针疫苗的基础上接种“加强针”。目前来看，所谓“加强针”可以是原来的疫苗，也可以用新的变异毒株或新的目的基因序列代替原来的疫苗。但所有的这些疫苗都是基于现有的一种变异株而言，存在一定的滞后性和局限性。比较理想的情况是，生产出一种疫苗，可以应对当前的各种变异株，还能预测将来可能的流行株，即所谓的第二代疫苗，可以从根本上解决变异株免疫逃逸的问题。

发明内容

为了解决COVID-19变异株感染性和免疫逃逸增强的问题，本发明提供了一种重组蛋白K-S及其制备方法和应用。

本发明的技术方案如下：

一种重组蛋白K-S，其核苷酸序列如SEQIDNO：1，或者蛋白序列如SEQIDNO：2。

本发明还提供一种重组蛋白K-S的制备方法，包括以下步骤：

(1)根据已经公布的基因序列(MT226610.1)，选取S1蛋白的核苷酸序列；

(2)在所述S1蛋白的核苷酸序列上，对6个关键位点进行突变构建新序列，突变位点及碱基分别为：G1251T，T1355G，G1450C， A1501T，A1841G和C2042G，编码蛋白后相应的位点为：K417N， L452R，E484Q，N501Y，D614G和P681R；

(3)所述新序列两端加上酶切位点NheⅠ(GCTAGC)和Kpn Ⅰ(GGTACC)，连接到真核表达载体pcDNA3.1中，利用CHO-S 细胞(ThermoFisher)进行表达；

(4)获取表达后的上清液，进行蛋白纯化得到重组蛋白K-S；

所述重组蛋白K-S核苷酸序列或蛋白序列如权利要求1所述。

本发明还提供重组蛋白K-S的应用，根据上述技术方案的所述重组蛋白K-S应用于新型冠状病毒免疫。

进一步地，所述免疫方式为皮内免疫。

进一步地，所述重组蛋白K-S与灭活疫苗进行序贯免疫。

本发明所使用的灭活疫苗已经公开，由中国医学科学院医学生物学研究所制备。将临床分离SARS-CoV-2病毒接种于非洲绿猴肾细胞系(Vero)后3-5天，细胞出现典型的病变，收获病毒培养液并过滤，先使用200μg/ml甲醛(HCHO)灭活48h，然后再以β丙内酯(BPL)灭活24h，经超滤浓缩、纯化和过滤得到疫苗原液，再加入氢氧化铝配制而成。