[发明专利]基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及方法，所述试剂盒包括正向引物，和纳米银针SERS基底，所述纳米银针SERS基底由5’端有巯基修饰的反向引物和纳米银针共价连接而得。其检测方法为：先采集纳米银针SERS基底的拉曼光谱信号；在包含待检测样品的反应溶液中插入所述纳米银针SERS基底，恒温扩增；取出纳米银针SERS基底，采集拉曼光谱信号，检测两次拉曼光谱信号的位移差异。相比起根据拉曼峰强度定量检测核酸的方法，本发明的新型冠状病毒核酸检测方法可以实现定性检测核酸，检测方法更简单、更准确、更可靠。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，更具体地说，本发明涉及一种基于拉曼光谱对新型冠状病毒核酸进行检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

核酸是生命最基本的遗传物质，开展核酸分子诊断对促进人类健康医疗的发展具有重要意义。表面增强拉曼光谱（SERS）是对与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动方面信息，是一种快速无损检测技术，具有制样简单、水的干扰小、非侵入、实时检测等优点，在核酸检测、病原微生物检测、肿瘤精准分子诊断等领域展现出良好的应用潜力。

目前已有许多科研小组开展了基于SERS技术的核酸检测研究，如采用拉曼分子和寡核苷酸探针链修饰金纳米颗粒构建SERS探针，在基片表面修饰链与目标链和SERS探针杂交形成三明治检测结构进行DNA检测[ Y.W.C. Cao, R.C. Jin, C.A. Mirkin,Nanoparticles with raman spectroscopic fingerprints for DNA and rnadetection, Science 297 (2002) 1536-1540]；又如以银纳米颗粒为核酸标记探针拉曼分子并包裹二氧化硅壳(Ag nanorice@MGITC@SiO2)作为SERS探针，利用光刻技术在硅圆片上形成三角状金纳米膜作为SERS活性检测基底，实现了乙型肝炎病毒检测[ Y. Liu, P.Y.Wu, Meditating metal coenhanced fluorescence and sers around goldnanoaggregates in nanosphere as bifunctional biosensor for multiple DNAtargets, Acs Appl. Mater. Interface 5 (2013) 5832-5844.]；Cui小组以银纳米棱镜作为基底，以4-MBA拉曼活性分子作为标记、探针寡核苷酸修饰的金纳米颗粒作为SERS探针，在水溶液中直接进行DNA检测[ M. Li, S.K. Cushing, H.Y. Liang, S. Suri, D.L.Ma, N.Q. Wu, Plasmonic nanorice antenna on triangle nanoarray for surface-enhanced raman scattering detection of hepatitis b virus DNA, Anal. Chem. 85(2013) 2072-2078]；Mirkin小组采用固态金属膜SERS基片构建检测多元基底，分别制作标记不同的拉曼探针分子、与目标检测物互补的探针链结合的SERS探针，开展多种病原检测[ R.C. Jin, Y.C. Cao, C.S. Thaxton, C.A. Mirkin, Glass-bead-based paralleldetection of DNA using composite raman labels, Small 2 (2006) 375-380]。随着SERS研究的深入及多学科领域的交叉发展，SERS技术有望广泛应用于核酸检测以及整个生物医学检测领域，为生命科学提供一种强大的分析技术。

2020年新型冠状病毒（2019-nCoV或SARS-CoV-2）在世界范围内疫情爆发，从政府端、医院临床端、产业端到普通百姓，对于病原微生物感染的认知和重视都达到前所未有的高度，不管对新型冠状病毒的临床检测还是进行实验室研究，如何快速、高效的检测新型冠状病毒核酸成为重中之重。