[发明专利]基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，包括：

(1)、正向引物；所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)、纳米银针SERS基底，所述纳米银针SERS基底是由5’端有巯基修饰的反向引物与纳米银针共价连接而得；所述反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；所述纳米银针是通过电化学工艺制备而成，包括以下步骤：先将银针依次在乙醇、丙酮和水中超声清洗；再将银针置于1M±0.1M硝酸中进行电化学处理，即得；所述电化学处理包括5个~10个周期，每个周期的操作方法为：将银针置于阳极电流持续8秒~10秒，再置于阴极电流持续8秒~10秒。

2.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述正向引物的5’端有FAM修饰。

3.根据权利要求1或2所述的基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括溶解剂、RT-基础扩增试剂和激活剂。

4.一种基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，所述方法获取拉曼光谱信号的位移差异，包括以下步骤：

(1)、采集纳米银针SERS基底的拉曼光谱信号，所述纳米银针SERS基底是由5’端有巯基修饰的反向引物与纳米银针共价连接而得；

所述纳米银针是通过电化学工艺制备而成，包括以下步骤：先将银针依次在乙醇、丙酮和水中超声清洗；再将银针置于1M±0.1M硝酸中进行电化学处理，即得；所述电化学处理包括5个~10个周期，每个周期的操作方法为：将银针置于阳极电流持续8秒~10秒，再置于阴极电流持续8秒~10秒；

(2)、将步骤(1)的纳米银针SERS基底插入包含待检测样品的反应溶液中，进行恒温扩增；

(3)、恒温扩增反应结束后，取出纳米银针SERS基底，采集纳米银针SERS基底的拉曼光谱信号，并与步骤(1)采集的拉曼光谱信号进行比较，检测拉曼光谱信号的位移差异。

5.根据权利要求4所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，步骤(3)中检测所述拉曼光谱信号的位移差异＞4cm^-1，或检测所述拉曼光谱信号的位移差异≤4cm^-1。

6.根据权利要求4所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，步骤(1)中所述纳米银针SERS基底的制备方法，包括以下步骤：

(a)、将5’端有巯基修饰的反向引物与三(2-羧乙基)膦混合，室温25min~35min进行还原；

(b)、将还原后的反向引物于60℃~70℃孵育8min~12min，马上置冰盒上冷却，冷却后平衡到室温；

(c)、在反向引物中插入纳米银针，室温反应25min~35min，使反向引物共价连接于纳米银针上，即得。

7.根据权利要求4所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，步骤(2)中所述恒温扩增为：38℃~44℃恒温反应20min~30min。

8.根据权利要求4所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述包含待检测样品的反应溶液的制备方法，包括以下步骤：

(a)、将15μl~25μl溶解剂、2.0μl~3.0μl正向引物、24.5μl~26.5μl待检测样品充分震荡混匀，离心，得到反应预混液；

(b)、将反应预混液加入至RT-基础扩增试剂中，充分震荡混匀，至RT-基础扩增试剂彻底溶解；

(c)、再加入1.5μl~2.5μl激活剂，充分震荡混匀，离心，得到总体积为50μl的包含待检测样品的反应溶液。