[发明专利]细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和应用

说明书

本申请涉及细胞筛选模型构建技术领域，具体而言，涉及一种细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和应用。细胞筛选模型的构建方法包括将报告基因表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中；将激素受体表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中，或将激素受体表达载体以游离形式转入至宿主细胞内。激素受体表达载体包括强组成型启动子和激素受体基因；报告基因表达载体包括激素反应元件和报告基因Lux。本申请的细胞筛选模型的构建方法构建的细胞筛选模型无需添加细胞裂解液和外源性底物即能够自主、持续、稳定产生荧光响应信号，从而准确、可靠、直观地评价物质对激素受体的激动或拮抗活性。

技术领域

本申请涉及细胞筛选模型构建技术领域，具体而言，涉及一种细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和应用。

背景技术

目前，评价物质对激素受体的激动或拮抗活性的细胞模型稳定性较差，同时需要在长时间反应后加入外源性反应底物和细胞裂解液才能产生响应信号，成本高、有效性和可行性较差。

发明内容

本申请的实施例的目的在于提供一种细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和筛选孕酮受体激动剂或孕酮受体拮抗剂的方法，其旨在改善现有的用于评价物质对激素受体的激动或拮抗活性的细胞模型稳定性较差、成本高以及可行性较差的问题。

本申请第一方面提供一种细胞筛选模型的构建方法，包括：将报告基因表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中；将激素受体表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中，或将激素受体表达载体以游离形式转入至宿主细胞内。

激素受体表达载体包括强组成型启动子和激素受体基因；报告基因表达载体包括激素反应元件和报告基因Lux。

激素受体选自孕酮受体、雄激素受体、雌激素受体、糖皮质激素受体或者盐皮质激素受体。

将包括激素反应元件和报告基因Lux的报告基因表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中，将包括强组成型启动子和激素受体基因的激素受体表达载体转入化至宿主细胞内，构建细胞筛选模型，可以使报告基因Lux在宿主细胞内更稳定的表达，提高响应信号的稳定性。相比现有技术，本申请的细胞筛选模型的构建方法构建的细胞筛选模型无需添加细胞裂解液和外源性底物即能够自主、持续、稳定产生荧光响应信号，从而准确、可靠、直观地评价物质对激素受体的激动或拮抗活性，特异性强、成本低且操作简单。

本申请第二方面提供一种细胞筛选模型的构建方法，包括：将孕酮受体表达载体以及报告基因表达载体转入至宿主细胞内。孕酮受体表达载体包括强组成型启动子和序列如SEQ ID NO.1所示的PR优化基因。报告基因表达载体包括孕酮激素反应元件HRE和报告基因Lux；其中，宿主细胞为酿酒酵母细胞。

可选地，强组成型启动子为TDH3。

将包括强组成型启动子和序列如SEQ ID NO.1所示的PR优化基因的孕酮受体表达载体以及包括孕酮激素反应元件HRE和报告基因Lux的报告基因表达载体转入至宿主细胞内，构建细胞筛选模型。序列如SEQ ID NO.1所示的PR优化基因可以提高孕酮受体在宿主细胞内的表达水平，TDH3可以增强PR优化基因的表达水平，提高响应信号的稳定性。相比现有技术，本申请的细胞筛选模型的构建方法构建的细胞筛选模型无需添加细胞裂解液和外源性底物即能够自主、持续、稳定产生荧光响应信号，可以实现物质对孕酮受体的激动或拮抗活性的动态监测，从而准确、可靠、直观地评价物质对孕酮受体的激动或拮抗活性，特异性强、成本低且操作简单。

本申请的第三方面提供一种细胞筛选模型，细胞筛选模型由如本申请第一方面或第二方面提供的细胞筛选模型的构建方法构建得到。

相比现有技术，本申请的细胞筛选模型无需添加细胞裂解液和外源性底物即能够自主、持续、稳定产生荧光响应信号，从而准确、可靠、直观地评价物质对激素受体的激动或拮抗活性，特异性强、成本低且操作简单。