[发明专利]细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202111103040.5 | 申请日： | 2021-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN113801889B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 苏晓鸥;黄苑;王瑞国;崔娜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/65;C12N15/67;C12N15/90;C12N15/12;C12N1/19;C12Q1/02;C12Q1/6897;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 陈秋梦 |
| 地址： | 100000 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞 筛选 模型 及其 构建 方法 应用 酵母菌 制备 | ||
1.一种酵母菌，其特征在于，所述酵母菌的命名为BLYrPRS，所述酵母菌的保藏编号为CGMCC NO.22947。
2.一种如权利要求1所述的酵母菌的制备方法，其特征在于，包括：构建孕酮受体表达载体PR/pRS315和报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi；将所述报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi中的孕酮激素反应元件5X HRE和报告基因Lux整合至Y1HGold酿酒酵母细胞的基因组中制得中间载体HRE-Lux/pAbAi/Y1HGold酵母；再将所述孕酮受体表达载体PR/pRS315转化至所述HRE-Lux/pAbAi/Y1HGold酵母中；
或，构建孕酮受体表达载体PR/pRS315和报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi；将所述孕酮受体表达载体PR/pRS315转化至Y1HGold酿酒酵母中制得中间载体PR/pRS315/Y1HGold；再将所述报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi中的孕酮激素反应元件5X HRE和报告基因Lux整合至所述PR/pRS315/Y1HGold酿酒酵母细胞的基因组中；
其中，所述孕酮受体表达载体PR/pRS315的序列如SEQ ID NO.5所示，所述报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi的序列如SEQ ID NO.6所示；
采用StuI限制性内切酶切割所述报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi后通过电击转化方式将所述孕酮激素反应元件5XHRE和所述报告基因Lux整合至Y1HGold酿酒酵母细胞的基因组中；
所述孕酮受体表达载体PR/pRS315的构建方法包括将序列如SEQ ID NO.1所示的PR优化基因、强组成型启动子TDH3以及线性化的pRS315-TEF-CYC1质粒连接；
所述报告基因表达载体HRE-Lux/pAbAi的构建方法包括将孕酮激素反应元件5X HRE、报告基因Lux以及线性化的pAbAi质粒连接。
3.一种筛选孕酮受体激动剂或孕酮受体拮抗剂的方法，其特征在于，包括：将如权利要求1所述的酵母菌的OD600调整为0.1-0.2，加入待筛选药物震荡孵育后检测荧光信号强度。
4.根据权利要求3所述的筛选孕酮受体激动剂或孕酮受体拮抗剂的方法，其特征在于，所述孵育的时间为3-24h。
5.根据权利要求3所述的筛选孕酮受体激动剂或孕酮受体拮抗剂的方法，其特征在于，所述孵育的温度为28-30℃。
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