[发明专利]寡糖的制备

权利要求书

1.一种通过使碳水化合物受体或所述受体的糖苷糖基化来制备重组寡糖、优选3～8个单糖单元的重组寡糖、特别是3～5个单糖单元的重组寡糖、或者所述寡糖的糖苷的方法，所述受体为单糖或二糖并且不是蔗糖，优选为乳糖，所述方法包括以下步骤：

a)提供优选为大肠杆菌细胞的细胞，其能够使所述受体内化至所述细胞，并且其包含：

-编码糖基转移酶的重组基因，所述糖基转移酶能够使活化的糖核苷酸的糖残基转移至在所述细胞中内化的受体，和

-在所述细胞中制造所述活化的糖核苷酸的生物合成路径，

b)在所述受体和蔗糖的存在下培养所述细胞，以及

c)从所述细胞、培养基或二者中分离所述寡糖，

所述方法特征在于，所述细胞还包含一种或多种编码异源PTS-依赖性蔗糖利用转运系统的基因，由此所述细胞能够使用蔗糖作为碳源、优选作为主要碳源、更优选作为唯一碳源，用于制造所述活化的糖核苷酸，以及作为能量来源、优选作为主要能量来源、更优选作为唯一能量来源，用于制造所述寡糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组寡糖或者所述碳水化合物受体的糖苷中的苷元选自以下基团：

-―OR_A，其中R₁为直链或支链烃链，当饱和时，其具有1～24个、优选1～6个碳原子，或者当不饱和时，其具有2～24个、优选2～6个碳原子，或者R_A表示芳基部分，或者R_A表示可通过氢解作用除去的基团，

-―X-R_B，其中X为N或S，并且R_B表示直链或支链烃链，当饱和时，其具有1～24个、优选1～6个碳原子，或者当不饱和时，其具有2～24个、优选2～6个碳原子，或者R_B表示芳基部分，或者R_B表示苯甲基，

-将异头碳原子与相邻碳原子通过-NH-C(＝O)-O-桥彼此连接的基团，从而形成如下醛糖的情况所示的稠合五元环：

-叠氮化物，

-―NH-C(R”)＝C(R’)₂，其中每个R’独立地为选自-CN、-COOH、-COO-烷基、-CO-烷基、-CONH₂、-CONH-烷基和-CON(烷基)₂的吸电子基团，或者其中两个R’基团连接在一起形成-CO-(CH₂)_2-4-CO-，并因此与其连接的碳原子形成5～7元的环烷基-1,3-二酮，在所述二酮中任意的亚甲基任选被1或2个烷基取代，并且其中R”为H或烷基，

-氨基酸残基，

-聚乙二醇残基，

-聚乙烯醇残基，和

-式A的α,β-不饱和酰胺基基团或者式B的α,β-不饱和羰基基团

其中Q₁、Q₂、Q₃和Q₄独立地为H和C₁-C₆烷基，其中所述烷基任选地被卤素、OH、硝基或苯基取代。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述异源PTS-依赖性蔗糖转运系统包括scr基因。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述scr基因包括蔗糖膜孔蛋白的scrY、PTS透性酶的scrA、蔗糖-6-磷酸水解酶的scrB、阻遏蛋白的scrR、以及任选的果糖激酶的scrK。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述scr基因在所述细胞中的两种质粒上，优选一种质粒携带有scrA并且另一种质粒携带有scrB。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中所述细胞包含一种或多种缺失lacZ和lacA的lac基因。