[发明专利]一种构建丙酸生产菌的方法

权利要求书

1.一种丙酸生产菌，其特征在于，通过包括以下步骤的方法构建：

A.中断谷氨酸棒杆菌基因组中乳酸脱氢酶ldh基因，得到菌株A，其中ldh的NCBI登录号为NP_602100.1；

B.构建用于在谷氨酸棒杆菌菌株中表达的大肠杆菌来源的甲基丙二酰辅酶A变位酶scpA基因表达元件、大肠杆菌来源的甲基丙二酰辅酶A脱羧酶scpB基因表达元件、大肠杆菌来源的丙酰辅酶A：琥珀酰辅酶A转移酶scpC基因表达元件，并将这三个基因表达元件分别或者共同克隆入用于在谷氨酸棒杆菌菌株中表达的质粒载体中，得到基因表达质粒，其中scpA的NCBI登录号为NP_417392.1，scpB的NCBI登录号为NP_311816.2，scpC的NCBI登录号为NP_417396.4；

C.将步骤B中得到的基因表达质粒转入步骤A中得到的菌株A中，筛选基因组中整合了所述scpA、scpB和scpC编码基因的阳性克隆即菌株C；

D.从菌株C中筛选出厌氧条件下生产丙酸的工程菌，其中

步骤A是敲除谷氨酸棒杆菌基因组中乳酸脱氢酶ldh基因，

步骤B中每个基因表达元件包括启动子Psod、编码基因序列、终止子rrnBT1T2，

甲基丙二酰辅酶A变位酶scpA编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1；甲基丙二酰辅酶A脱羧酶scpB编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2；丙酰辅酶A：琥珀酰辅酶A转移酶scpC编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，

步骤B中三个基因表达元件克隆入同一个质粒载体pEKEX2中，得到pEKEX2-ScpABC质粒，其核苷酸序列为SEQ ID NO:4。

2.如权利要求1所述的丙酸生产菌，其特征在于，宿主谷氨酸棒杆菌是谷氨酸棒杆菌ATCC13032。

3.如权利要求1所述的丙酸生产菌，其特征在于，步骤D中筛选出的工程菌发酵时不生产乳酸。

4.如权利要求1-3中任一项所述的丙酸生产菌在生产丙酸中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，通过菌株的发酵来生产丙酸。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，丙酸生产菌先进行通气发酵即有氧发酵，菌体增殖接近或者进入平台期时开始厌氧发酵。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，发酵得到的丙酸制备成丙酸钙。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，发酵结束后，离心去除菌体，上清液浓缩，调节pH至2.5，减压蒸馏回收丙酸，回收丙酸中加入氢氧化钙溶液，将pH调至7.5，喷雾干燥，获得丙酸钙晶体。