[发明专利]一种抗烟草花叶病毒的核酸农药及其合成、纯化和应用

权利要求书

1.一种TMV-cp基因，其特征在于：所述TMV-cp基因两端分别含有一个T7启动子，其相应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种在TMV-cp基因序列两端分别引入一个EcoRI酶切位点， 得到体外转录模板TMV-EcoRI-EcoRI-cp，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种质粒pT7B-TMV-EcoRI-EcoRI-cp，其特征在于：其采用权利要求1所述的TMV-cp基因，在两个T7启动子的左侧和右侧分别引入EcoRI酶切位点得到。

4.根据权利要求3所述的质粒pT7B-TMV-EcoRI-EcoRI-cp，其特征在于：在T7启动子的左侧引入EcoRI酶切位点的引物：正向引物序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物序列如SEQID NO.5所示。

5.根据权利要求3所述的质粒pT7B-TMV-EcoRI-EcoRI-cp，其特征在于：在T7启动子的右侧引入EcoRI酶切位点的引物：正向引物序列如SEQ ID NO.6所示，反向引物序列如SEQID NO.7所示。

6.一种工程菌株，其特征在于：其采用权利要求3所述的质粒pT7B-TMV-EcoRI-EcoRI-cp转化E.coliDH5α感受态细胞，得到E.coliDH5α/pT7B-TMV-EcoRI-EcoRI-cp菌株。

7.一种抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA，其特征在于：其序列如SEQ IDNO.3所示。

8.一种抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA的合成方法，其特征在于：在权利要求3所述的质粒pT7B-TMV-EcoRI-EcoRI-cp中加入内切酶EcoRI，加入含肌苷酸的三磷酸核苷混合物进行体外转录，得到TMV-cp(I)-dsRNA。

9.一种抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA的纯化方法，其特征在于：在转录体系中加入DNaseI，37-40℃下保温0.5-1h，得到TMV-cp(I)-dsRNA粗品；对所述TMV-cp(I)-dsRNA粗品进行阴离子交换层析，再经切向流超滤浓缩，去除体系中的离子、未反应的核苷三磷酸，获得抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA。

10.一种如权利要求7所述的抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA在防治烟草花叶病毒中的应用。