[发明专利]一种口腔类微生物数量快速测定方法、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种口腔类微生物数量快速测定方法、试剂盒及应用，本发明所述测定方法包括下列步骤：（1）将待测样品进行ATP裂解释放；（2）在上述混合液中加入荧光检测液，混合均匀；（3）用荧光检测仪读取荧光值；（4）根据ATP标准品制作的标准曲线，获得微生物数量。本发明方法灵敏度高、成本低廉、操作简易，能够快速有效地测定口腔类微生物数量，可用于口腔清洁类产品抑菌效果评价和临床诊断等领域。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种口腔类微生物数量快速测定方法、试剂盒及应用。

背景技术

在人的口腔内繁殖有大量的微生物，其中可能包含诱发牙齿龋齿、牙龈炎和牙周炎或口腔炎的微生物。因此，口腔类微生物数量的测量对于口腔疾病的诊断、预后以及口腔清洁类产品抑菌效果的评价等具有重要意义。目前测量口腔类微生物数量的方法主要为微生物平板培养，虽然该方法灵敏度高，为微生物数量测定的“金标准”，但其存在操作复杂、所需时间长、不能测定无法培养微生物的数量等缺点。因此，寻找一种不依赖于培养的操作简易、灵敏度高的口腔类微生物数量的快速测定方法是相关领域技术人员亟待解决的问题。

ATP生物荧光检测是基于生物发光体系的发光机理所设计，生物体发光细胞内具有特殊的发光物质——荧光素及荧光素酶，荧光素在荧光素酶催化下，由三磷酸腺苷（ATP）激活发出荧光光子。由于所有生物活细胞中含有恒量的ATP，所以ATP含量可以清晰地表明样品中微生物与其他生物残余的多少。其荧光强度与ATP浓度在一定范围内成线性关系。利用这一发光体系测定微生物释放出的ATP，可进行微生物含量的测定，为在数分钟内检测微生物提供了一种简便而灵敏的方法。目前，尚未见有将ATP生物荧光检测方法用于测定口腔类微生物数量的报道。

发明内容

本发明目的在于，一种口腔类微生物数量快速测定方法。以克服当前口腔微生物数量测定中所遇到的操作复杂、所需时间长、不能测定无法培养微生物的数量等问题。

本发明的再一目的在于：提供一种口腔类微生物数量快速测定试剂盒。

本发明的又一目的在于：提供一种口腔类微生物数量快速测定方法的应用，所述应用为口腔清洁类产品抑菌效果评价。

本发明目的通过下述方案实现：一种口腔类微生物数量快速测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）将待测样品进行ATP裂解释放；

（2）在上述混合液中加入荧光检测液，混合均匀；

（3）用荧光检测仪读取荧光值；

（4）根据ATP标准品制作的标准曲线，获得微生物数量。

本发明克服了当前口腔微生物数量测定中所遇到的操作复杂、所需时间长、不能测定无法培养微生物的数量等问题。基于口腔类微生物的特点，基于ATP生物荧光检测方法所提供的一种口腔类微生物数量测定方法具有操作简便、检测时间短，灵敏度高，降低了无法培养微生物的漏检率。

本发明所述的待测样品包括临床诊断样品、口腔类微生物的纯培养物中的一种或多种。所述的临床诊断样品包括拭子、唾液中的一种或多种。

本发明所述的ATP裂解释放的方法包括表面活性剂裂解释放、加热煮沸裂解释放、超声裂解释放、酸裂解释放、碱裂解释放等裂解释放方法中的一种。

本发明所述的荧光检测液包括荧光素、荧光素酶中的一种或多种。所述的荧光检测液是每60mL的ATP荧光试剂缓冲溶液包含32mg荧光素酶、25.2mg的D-荧光素和112mg牛血清蛋白。其中，所述的ATP荧光试剂缓冲溶液是每1000mL水中溶解有4.468g三羟甲基氨基甲烷、0.732g乙二胺四乙酸二钠、3.232g乙酸镁、26.8mg二巯基苏糖醇、100g的β-环糊精和3.7g葡萄糖。

本发明所述的荧光检测仪，包括生物化学发光检测仪、实时荧光检测仪、便携式荧光检测仪等。