[发明专利]一种口腔类微生物数量快速测定方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种口腔类微生物数量快速测定方法，采用ATP标准品制作标准曲线，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）将待测样品进行ATP裂解释放；

（2）在上述混合液中加入荧光检测液，混合均匀；

（3）用荧光检测仪读取荧光值；

（4）根据ATP标准品制作的标准曲线，获得微生物数量。

2.如权利要求1所述的一种口腔类微生物数量快速测定方法，其特征在于，所述的待测样品包括临床诊断样品、口腔类微生物的纯培养物，其中，所述的临床诊断样品包括拭子、唾液中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的一种口腔类微生物数量快速测定方法，其特征在于，所述的ATP裂解释放的方法包括表面活性剂裂解释放、加热煮沸裂解释放、超声裂解释放、酸裂解释放或碱裂解释放方法中的一种，其中，所述的表面活性剂包括十六烷基三甲基溴化铵、苯扎溴铵、苯扎氯胺、二羟基苏糖醇、十二烷基硫酸钠、三氯乙酸等中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的一种口腔类微生物数量快速测定方法，其特征在于，所述的荧光检测液是每60mL的ATP荧光试剂缓冲溶液包含32mg荧光素酶、25.2mg的D-荧光素和112mg牛血清蛋白，其中，所述的ATP荧光试剂缓冲溶液是每1000mL水中溶解有4.468g三羟甲基氨基甲烷、0.732g乙二胺四乙酸二钠、3.232g乙酸镁、26.8mg二巯基苏糖醇、100g的β-环糊精和3.7g葡萄糖。

5.如权利要求1所述的一种口腔类微生物数量快速测定方法，其特征在于，所述的荧光检测仪，包括生物化学发光检测仪、实时荧光检测仪、便携式荧光检测仪中的一种或多种。

6.如权利要求1所述的一种口腔类微生物数量快速测定方法，其特征在于，绘制ATP标准品标准曲线按下述步骤：

1）取0.5mmol/L的 ATP标准品，加入400μL冰浴无菌生理盐水轻轻振动混匀，制得10^-4mol/L的ATP标准品稀释液；然后，

2）依次进行10倍稀释，获得10^-5～10^-10mol/L的标准品系列稀释液；

3）各浓度梯度ATP标准品稀释液分别与0.03% CTAB按体积比10:1轻轻振动混匀，4^oC离心机，10000g离心5分钟，进行ATP裂解释放；

将20μL梯度ATP标准品稀释液加入100μL自行配制的荧光检测液，混合均匀，反应3分钟；

用荧光检测仪读取荧光值；

各个稀释梯度依次检测三个平行样品并求取平均值，以ATP标准品浓度对数值为横坐标，以对应荧光强度的对数值为纵坐标，绘制ATP标准品的标准曲线。