[发明专利]一种核桃粕乙酰胆碱酯酶抑制肽及其制备方法与应用有效
申请号: | 202111019074.6 | 申请日: | 2021-09-01 |
公开(公告)号: | CN113698454B | 公开(公告)日: | 2022-05-24 |
发明(设计)人: | 任迪峰;王子纯;翟鑫禹;尹玉茜 | 申请(专利权)人: | 北京林业大学 |
主分类号: | C07K7/06 | 分类号: | C07K7/06;C07K5/107;C07K5/103;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A23L33/18;A23L29/00;A61K38/07;A61K38/08;A61K9/107;A61K47/12;A61K47/24 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 核桃 乙酰 胆碱酯酶 抑制 及其 制备 方法 应用 | ||
本发明属于食品深加工技术领域,具体涉及一种提取自核桃粕的乙酰胆碱酯酶抑制肽及其制备方法与应用。所述乙酰胆碱酯酶抑制肽自N端到C端的氨基酸序列为:Tyr‑Val‑Pro‑His‑Trp(YVPHW)、Phe‑Tyr‑Arg‑Arg(FYRR)或Leu‑Ala‑Pro‑Phe(LAPF),半抑制浓度IC50分别为139.10±1.34μg/mL、304.20±2.57μg/mL和318.80±1.98μg/mL。本发明提供的短肽酶抑制作用明显,且采用核桃粕为原料,生产成本低,经济效益高。本发明还通过两步乳化法制备了负载短肽YVPHW的双纳米乳液,包封率可达92.65±0.77%。该双纳米乳液分布较为均匀,有较好的环境稳定性,可改善短肽YVPHW在胃肠道里很快被消化的缺点,达到缓慢释放的效果,为核桃粕深加工提供理论基础。
技术领域:
本发明属于食品深加工技术领域,具体涉及一种分离自核桃粕的乙酰胆碱酯酶抑制肽及其制备方法与应用。
背景技术:
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是神经退行性痴呆的最主要病因,也是老年人群发病率和死亡率的主要来源之一。其主要表现为记忆丧失、语言能力退化、行为异常和认知功能障碍。AD患者由于缺乏日常生活能力,给家庭和社会带来了沉重的负担。因此阿尔茨海默症是一项亟待解决的公共卫生问题,也是近些年来的研究重点。AD的病理特征主要有乙酰胆碱(Acetylcholine,ACh)缺失、淀粉样蛋白沉积、tau蛋白过磷酸化等。在中枢神经系统中的胆碱能神经是构成学习和记忆的重要基础。胆碱能神经丢失学说是目前最被认可的AD发病机制,该学说认为,大脑中乙酰胆碱水平的下降会导致AD患者的记忆和认知障碍,AD患者神经间隙中乙酰胆碱酯酶活性较高,因此抑制乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)的活性,可以提高突触间隙乙酰胆碱的浓度,有利于AD患者改善认知功能。
现代医学实验研究发现,核桃对脑健康具有十分重要的作用。研究者发现核桃具有大脑所需的脂肪酸、微生物、矿物质等营养物质,可提升认知能力。核桃中含有14~28%的蛋白质,因其蛋白质的氨基酸组成种类齐全,包含了8种人体必需氨基酸,并且消化率、利用度高,从而被认为是优质蛋白质。作为核桃蛋白的酶解产物,核桃多肽因吸收率高、生物效价高、引起研究者的关注。文献报道指出,核桃蛋白多肽具有抗氧化、降压、抑菌、改善学习记忆等功效。如:脱脂核桃粕酶解液可作为天然抗氧化剂用于开发针对记忆障碍的功能性食品。天然还原肽可以降低与氧化、衰老等相关疾病的发生几率,因此,常被用于防衰老和改善记忆障碍保健食品的研究和开发。
核桃(Juglans regia L.)是市面上常见的坚果类作物之一,具有丰富的营养价值和药用功效。核桃榨油后产生大量的副产物核桃粕,通常以饲料低价出售,不仅造成核桃蛋白资源的浪费,也严重阻碍了核桃产业的发展。生物酶解技术作为一种绿色生物转化手段,一方面有助于提高底物的生物利用率,另一方面可以将核桃粕蛋白分解成更利于人体吸收的小分子化合物,增加功能活性,提高营养价值。
本研究以冷榨核桃粕为原料,利用双酶酶解法制备核桃多肽,采用超滤、葡聚糖凝胶层析等方法分离纯化核桃粕蛋白酶解液,并测定其对乙酰胆碱酯酶的抑制作用,筛选出抑制活性较高的多肽组分,对纯化后的核桃粕多肽进行液质分析,确定核桃粕多肽的氨基酸序列,通过分子对接技术筛选处对乙酰胆碱酯酶抑制活性较好的多肽序列,人工合成乙酰胆碱酯酶抑制肽,并检测其对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。
发明内容:
为解决以上问题,本发明以核桃粕为原料,通过复合酶解法制备活性多肽,并采用超滤、葡聚糖凝胶色谱进行纯化,LC-MS/MS鉴定多肽序列,并利用分子对接技术筛选抑制乙酰胆碱酯酶的活性片段,针对打分较高的多肽进行人工合成并验证其乙酰胆碱酯酶抑制活性;最后,再次利用分子对接技术对单个抑制活性多肽与受体蛋白AChE进行分子对接,分析其相互作用的关键氨基酸及作用力。
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