[发明专利]一种采用固体发酵制备新型抗菌肽饲料添加剂的方法

说明书

本发明涉及生物工程制造领域，公开了一种采用固体发酵制备新型抗菌肽饲料添加剂的方法，包括凝结芽孢杆菌种子液制备、凝结芽孢杆菌菌液制备、混合物制备、固体发酵、检测分装等步骤。本发明的制备工艺简单，成本较低，容易操作；阳起石为常用的中药炮制矿物药物，来源广泛；本发明获得的新型抗菌肽饲料添加剂，是一种促生长、绿色环保饲料添加剂，成本低廉，应用广泛，有很高的推广和应用价值，有利于在畜牧养殖行业推广。

技术领域

本发明涉及生物工程制造领域，具体涉及一种采用固体发酵制备新型抗菌肽饲料添加剂的方法。

背景技术

2020年7月1日后，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。饲料禁止使用促生长类抗生素，对绿色健康养殖提出了更高的任务要求。新型的畜禽养殖绿色饲料添加剂成了畜牧行业科研工作者研究的热点。

由微生物代谢合成的小分子蛋白或多肽物质(抗菌肽)具有抑制或杀灭多种致病菌和腐败菌的能力，并且具有安全、无毒、高效等特点，被认为是天然的生物防腐剂和良好的抗生素替代物，在食品领域和畜牧行业具有广阔的应用前景。但现有技术中含有抗菌肽的饲料添加剂制备工艺复杂，成本较高，无法满足日常的使用需求，因此，亟需要一种采用固体发酵制备新型抗菌肽饲料添加剂的方法，来满足动物的饲养。

发明内容

本发明的目的就在于解决上述技术问题，提供一种采用固体发酵制备新型抗菌肽饲料添加剂的方法。

为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的：

一种采用固体发酵制备新型抗菌肽饲料添加剂的方法，包括以下步骤，

S1凝结芽孢杆菌种子液制备，将凝结芽孢杆菌接种于种子培养基内，在30-40℃温度下培养36-60h后，获得凝结芽孢杆菌种子液；

S2凝结芽孢杆菌菌液制备，将步骤S1获得的凝结芽孢杆菌种子液，以5-10％的接种量接种于种子培养基内，在30-40℃温度下培养24-36h后，得到凝结芽孢杆菌菌液；

S3混合物制备，将5-10重量份的阳起石、90-95重量份的固体发酵辅料放入到固体发酵罐中进行高压蒸汽灭菌，冷却后得到混合物；

S4固体发酵，将凝结芽孢杆菌菌液与混合物在固体发酵罐中充分搅拌混合，进行固体发酵，当固体发酵罐内的物料pH值小于4.0，抗菌肽的含量≥10g/kg，停止发酵，得到含有抗菌肽的发酵混合物；

S5检测分装，将步骤S4获得的发酵混合物，检测分装，得到新型抗菌肽饲料添加剂成品。

优选的，步骤S1、S2中，每1000g种子培养基包括以下各组分：蛋白胨5-15g，葡萄糖2-5g，豆饼粉10-20g，可溶性玉米淀粉8-20g，硫酸锰0.2-0.5g，氯化钠2-8g，维生素B₁₂0.002-0.005g，其余为水。

优选的，所述凝结芽孢杆菌来源CICC，菌株编号为CICC20138。

优选的，所述凝结芽孢杆菌种子液的菌体浓度为1×10⁷-1×10⁸CFU/ml。

优选的，所述步骤S1的培养过程的pH值为6.5-7.0；所述步骤S2的培养过程的pH值为6.5-7.0。

优选的，所述步骤S3中，高压蒸汽灭菌的温度为121℃，灭菌时间为15min。

优选的，所述步骤S3中，固体发酵辅料包括以下质量百分比的各组分：20％葡萄糖、40％豆饼粉、40％玉米芯粉。

优选的，所述步骤S4中，固体发酵的发酵温度为30-45℃，发酵时间为60-96h。

优选的，所述步骤S4中，凝结芽孢杆菌菌液与混合物的质量比为1:3-5。