[发明专利]一种可高效用于黏细菌原核转录组建库测序的方法在审
| 申请号： | 202110997140.0 | 申请日： | 2021-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN113736851A | 公开（公告）日： | 2021-12-03 |
| 发明（设计）人： | 董红红;朱红惠;董义杰;姚青 | 申请（专利权）人： | 广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510070 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 用于 细菌 转录 组建 库测序 方法 | ||
1.一种可高效用于黏细菌原核转录组建库测序的方法，其包括样品准备、RNA提取、mRNA富集及片段化，将mRNA反转录第一链cDNA，再合成第二链cDNA、构建文库、上机测序和对数据进行分析，其特征在于，所述的将mRNA反转录第一链cDNA，其使用的逆转录酶是Uni Reverse Transcriptase逆转录酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的将mRNA反转录第一链cDNA的反应体系为：片段化的mRNA 500ng，Uni Reverse Transcriptase Enzyme Mix 1μL,0.1μg/μL Random Primer 1μL，2×TS-Uni Reaction Mix 10μL，RNase-free Water up to20μL；最后的反应条件为25℃孵育10min后，52℃孵育30min，降温至10℃结束反应。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的将mRNA反转录第一链cDNA是先将片段化的mRNA、RNase-free Water与Random Primer混合，65℃反应5min后冰浴2min，再加入2×TS-Uni Reaction Mix和Uni Reverse Transcriptase Enzyme Mix，25℃孵育10min，52℃孵育30min，降温至10℃结束反应。
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