[发明专利]氟苯尼考半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用

说明书

本发明公开了氟苯尼考半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用。本发明首次公开了一种新的氟苯尼考半抗原、人工抗原及其制备方法，用所述氟苯尼考人工抗原免疫动物，可得到效价高，灵敏度高的抗体，制备过程简单、经济，制备的多克隆抗体对氟苯尼考的检测灵敏度可达2.08ng/mL。本发明所提供的氟苯尼考半抗原及其制备的抗体，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的氟苯尼考检测方法提供了新手段。

技术领域

本发明涉及了生物检测分析技术领域，特别是涉及了氟苯尼考半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用。

背景技术

氟苯尼考(Florfenicol，FF)，又名氟甲砜霉素，是在八十年代后期人工合成的甲砜霉素单氟衍生物。作为一种新的兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，我国于2000年批准其为国家二类新药。其药理作用机制主要是通过抑制肽酰基转移酶活性干扰细菌蛋白质的合成，从而产生广谱抑菌作用。由于氯霉素被禁用，氟苯尼考因其较强的抗菌效果和较低的毒副作用，已成为当前使用最广泛、用量最大的抗菌药物之一，广泛用于畜禽及水产养殖过程中疾病的预防和治疗。

然而，氟苯尼考消除半衰期长，临床上用药不合理易产生残留，通过食物链进入人体后，对消费者的健康安全造成威胁。为加强对动物性食品中氟苯尼考的残留监管，保证动物产品质量安全，欧盟委员会规定了动物组织中氟苯尼考的最大残留限量，其中在牛肌肉、肝脏和肾脏组织中的最大残留限量分别为200、3000和300μg/kg，泌乳期家畜禁用；我国农业部也规定了动物组织中氟苯尼考的最大残留限量，其中在家禽肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织中的最大残留限量分别为100、200、2500和750μg/kg，产蛋期家禽禁用。

目前，我国行业标准中对动物源性食品中氟苯尼考的残留检测主要采用液相色谱-串联质谱法。此方法虽然特异性强、灵敏度高，但是样品前处理复杂繁琐，检测时间长，成本也较高，难以实现快速、简便的现场检测要求，推广使用受到限制。

免疫分析方法是一种基于抗原与抗体特异性反应的定性定量分析方法，该方法特异性强、灵敏度高，反应快速，操作简单，适合现场大量样本的实时检测。抗原决定了抗体的特异性及灵敏度，因此制备高质量氟苯尼考人工抗原，开发灵敏度高的抗氟苯尼考抗体，对实现氟苯尼考药物残留的快速检测十分重要。

发明内容

本发明提供氟苯尼考半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

第一方面，氟苯尼考半抗原，其特征在于，其结构式如式Ⅰ所示:

作为本发明提供的所述的氟苯尼考半抗原的合成方法的一种优选实施方式，所述合成方法包括如下步骤：

S1、以DMF为溶剂，加入氟苯尼考胺和4-(3-溴丙基)苯甲酸甲酯，向混合物中加入碘化钾和碳酸氢钠，搅拌；

S2、将步骤S1的产物冷却至室温，加入水，并用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤合并有机层，用无水硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂得到残留物；

S3、以甲醇和THF作溶剂，加入步骤S2的产物、LiOH水溶液，室温搅拌；

S4、将S3得到的混合物浓缩，向残余物中加入水，然后用乙酸乙酯萃取混合物；向水层中添加H₂SO₄将pH值调节至5左右；通过过滤收集混合物中的沉淀物，在真空下干燥，得到的白色固体为氟苯尼考半抗原。

作为本发明提供的所述的氟苯尼考半抗原的合成方法的一种优选实施方式，所述合成方法包括如下步骤：

S1、以DMF为溶剂，加入4.95g氟苯尼考胺和5.14g 4-(3-溴丙基)苯甲酸甲酯，向混合物中加入3.60g碘化钾和3.36g碳酸氢钠，搅拌；