[发明专利]一种牦牛皮抗氧化多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种牦牛皮抗氧化肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；其是以新鲜牦牛皮为原料提取蛋白，然后采用复合酶对其进行旋蒸脱溶酶解，膜分离、凝胶分离、反相HPLC分离以及高效质谱鉴定得到的抗氧化多肽。本发明通过连续旋蒸脱溶双酶解法，分离纯化和质谱鉴定得到牦牛皮抗氧化性多肽，并进一步对抗氧化肽进行饱和脂肪酸修饰提高牦牛抗氧化肽的稳定性、生物活性与膜渗透性，本发明牦牛皮抗氧化肽在功能性食品、化妆品以及医药领域具有广阔的开发和应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种牦牛皮抗氧化多肽及其制备方法与应用。

背景技术

自从Harman提出自由基理论以来, 人们认识到人体内氧化产生的自由基与人的衰老以及许多疾病息息相关。在正常生理状态下，机体内自由基的产生与清除处于动态平衡状态，但当机体处于不良环境状态时，导致平衡失调，自由基就会攻击生命大分子物质及细胞壁，造成机体的多种损伤和病变，加速机体的衰老。活性氧是体内重要的一类自由基，而过量的活性氧引起的氧化应激导致癌症、糖尿病、炎症、心血管疾病、哮喘以及阿尔茨海默病等多种慢性疾病以被证实。

人体可以通过适当摄入具有抗氧化活性的物质降低体内自由基水平，减轻机体的氧化损伤，预防疾病的产生，其中外源性具有抑制生物大分子过氧化或清除体内自由基功效的抗氧化肽起着非常重要的作用。抗氧化肽作为一种天然抗氧化剂，其结构相对简单、易吸收、稳定性好、无免疫反应性，不仅具有较强的抗氧化活性，还具有降血压和抗癌等其他保健功效，在功能性食品、化妆品以及医药领域越来越受到人们的关注。

目前，动物和植物蛋白酶解法是生产抗氧化肽的重要原料来源，且制备方法已趋于成熟。牦牛为稀有畜种，有“世界屋脊”之称，我国约占世界牦牛总数的95％以上，牦牛副产物的循环再利用仍处于起步阶段，作为抗氧化肽的制备来源可成为重要的加工途径。牦牛副产物中如牦牛骨（CN108342441A、CN107141336B）、牦牛血（CN110283234A）和牦牛乳蛋白（CN102787156B）等制备出抗氧化肽VIEAVVQSV、TLPDTEKQIKKQ、GTW、CQC，而以牦牛皮制备抗氧化肽鲜有报道。

酶解法产生的很多小肽结构相近，分子量也相差不大，如何将目标抗氧化肽高效地进行分离纯化和鉴定，以方便进行规模化生产是仍是需要解决的首要问题，同时，抗氧化肽存在口服生物利用度低、半衰期短、肝脏和肾脏清除快等缺点，

是限制其在食品和药物中应用的一个巨大障碍。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种牦牛皮抗氧化多肽及其制备方法与应用，本发明以新鲜的牦牛皮为原材料，通过连续旋蒸脱溶双酶解法，分离纯化和质谱鉴定得到牦牛皮抗氧化性多肽，并进一步对抗氧化肽进行饱和脂肪酸修饰提高牦牛抗氧化肽的稳定性、生物活性与膜渗透性，本发明增加了天然抗氧化的来源，分子修饰提高了抗氧化肽的生物活性，大大增强抗氧化肽在功能性食品、化妆品以及医药领域的开发应用。

本发明通过下述技术方案实现。

一种牦牛皮抗氧化肽，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；在本发明中，将牦牛皮抗氧肽分别命名为牦牛皮抗氧肽Y1和牦牛皮抗氧肽Y2，Y1的氨基酸序列为GVVGLPGQR（如SEQ ID NO.1所示），其分子量为882.03Da，Y2的氨基酸序列为IIAPPER（如SEQ ID NO.2所示），其分子量为794.95 Da，牦牛皮抗氧肽Y1和牦牛皮抗氧肽Y2两者均具有明显的抗氧化能力。

一种牦牛皮抗氧化肽的制备方法，以新鲜牦牛皮为原料提取蛋白，然后采用复合酶对其进行旋蒸脱溶酶解，膜分离、凝胶分离、反相HPLC分离以及高效质谱鉴定得到抗氧化多肽。

上述牦牛皮抗氧化肽的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤S1，酶解