[发明专利]碱性蛋白酶基因、杂合启动子、重组表达载体、重组表达工程菌、碱性蛋白酶及方法和应用有效
| 申请号： | 202110952632.8 | 申请日： | 2021-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN113699138B | 公开（公告）日： | 2023-10-24 |
| 发明（设计）人： | 王建荣;赵良忠;陈浩;李明;周小虎;周晓洁;黄展锐 | 申请（专利权）人： | 邵阳学院 |
| 主分类号： | C12N9/54 | 分类号： | C12N9/54;C12N15/57;C12N15/113;C12N15/75;C12N15/90;C12N15/67;C12N15/64;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 长沙智嵘专利代理事务所(普通合伙) 43211 | 代理人： | 李婷婷 |
| 地址： | 422000 湖南省邵阳市*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 碱性 蛋白酶 基因 启动子 重组 表达 载体 工程 方法 应用 | ||
1.一种碱性蛋白酶基因bcp，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种碱性蛋白酶BCP，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种用于在枯草芽孢杆菌中高效表达碱性蛋白酶的杂合启动子，其特征在于，所述杂合启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述的碱性蛋白酶基因bcp、权利要求3所述的杂合启动子和信号肽，所述信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。
5.一种重组表达工程菌，其特征在于，包括权利要求4所述的重组表达载体。
6.一种根据权利要求2所述的碱性蛋白酶BCP的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
提供碱性蛋白酶基因bcp、表达载体和表达菌株；
对碱性蛋白酶基因bcp进行扩增，扩增产物与表达载体进行连接，获得重组表达载体；
将重组表达载体基因整合到表达菌株，获得重组表达工程菌；
对所述重组表达工程菌进行培养，获得碱性蛋白酶BCP；
其中，所述碱性蛋白酶基因bcp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
7.根据权利要求6所述的碱性蛋白酶BCP的制备方法，其特征在于，
所述表达载体包括载体pHY、杂合启动子和信号肽；和/或
所述表达菌株为枯草芽孢杆菌RIK1285。
8.根据权利要求6所述的碱性蛋白酶BCP的制备方法，其特征在于，
所述重组表达载体基因整合到枯草芽孢杆菌RIK1285的中温淀粉酶基因位点。
9.根据权利要求6所述的碱性蛋白酶BCP的制备方法，其特征在于，
所述碱性蛋白酶基因bcp进行扩增的过程中，用于扩增的引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQID NO:21所示。
10.一种根据权利要求2所述的碱性蛋白酶BCP在水解蛋白质中的应用，其特征在于，
碱性蛋白酶BCP的反应温度为20℃～70℃；
碱性蛋白酶BCP的反应pH值为7～11。
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