[发明专利]一种提高毕赤酵母碳源转化率的基因工程改进方法

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115为出发菌株，不表达1,3-β-D-葡聚糖合酶和α-1,2-甘露糖转移酶；

编码1,3-β-D-葡聚糖合酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码α-1,2-甘露糖转移酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的基因工程菌在表达目的蛋白方面的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述目的蛋白选自：免疫球蛋白、抗体片段、人血纤维蛋白溶酶原的kringle结构域、促红细胞生成素、细胞因子、凝血因子、可溶性的IgE受体α-链、尿激酶、糜蛋白酶、脲胰蛋白酶抑制剂、IGF-结合蛋白、表皮生长因子、生长激素-释放因子、膜联蛋白V融合蛋白、血管生成抑制因子、血管内皮生长因子-2、骨髓前体抑制因子-1、骨保护素、α-1抗胰蛋白酶、DNA酶II、甲胎蛋白、胰岛素、Fc-融合体、HSA-融合体。

4.一种提高毕赤酵母碳源转化率的方法，其特征在于，所述方法为，沉默或敲除毕赤酵母GS115基因组上1,3-β-D-葡聚糖合酶相关基因和α-1,2-甘露糖转移酶相关基因，编码1,3-β-D-葡聚糖合酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码α-1,2-甘露糖转移酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，敲除的方法为Red同源重组技术、锌指核酸酶技术、转录激活子样效应因子技术或成簇的规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统；沉默的方法为RNA干扰或反义寡核苷酸技术。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述敲除为利用Crisper-Cas9的方法敲除毕赤酵母基因组上编码1,3-β-D-葡聚糖合酶的基因和编码α-1,2-甘露糖转移酶的基因；所述沉默为利用反义mRNA沉默的方法使得编码1,3-β-D-葡聚糖合酶的基因和编码α-1,2-甘露糖转移酶的基因沉默，无法正常翻译。