[发明专利]一种检测人博卡病毒全基因组的引物组合及其检测方法

权利要求书

1.一种用于人博卡病毒全基因组检测的引物组合，其特征在于，其包括12对引物，所述12对引物具有如SEQ ID NO.1-24所示的核苷酸序列。

2.一种用于人博卡病毒全基因组检测的引物组合，其特征在于，其包括12对引物，所述12对引物为在权利要求1所述的引物组合的基础上，将其中一个或多个引物中的一个或多个碱基替换为简并碱基。

3.权利要求1或2所述的引物组合的如下任一种应用：

(1)在制备用于检测人博卡病毒的试剂盒中的应用；

(2)在制备用于人博卡病毒分型的试剂盒中的应用；

(3)在制备用于检测人博卡病毒基因组变异的试剂盒中的应用。

4.试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述的引物组合。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，所述12对引物在多重PCR反应体系中的工作浓度为9-11μM。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述多重PCR的反应程序包括：94-98℃、2-5min；94-98℃、10-40s，60℃、20-40s，72℃、3-5min，18-30个循环；72℃、2-5min。

7.权利要求1或2所述的引物组合或权利要求4～6任一项所述的试剂盒在人博卡病毒全基因组变异检测或人博卡病毒的流行病学分析中的应用。

8.一种检测人博卡病毒全基因组的方法，其特征在于，以待测样本的DNA为模板，利用权利要求1或2所述的引物组合进行多重PCR扩增。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述多重PCR扩增的反应体系中，所述12对引物的浓度为9-11μM；

和/或，所述多重PCR扩增的反应程序包括：94-98℃、2-5min；94-98℃、10-40s，60℃、20-40s，72℃、3-5min，18-30个循环；72℃、2-5min。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，将多重PCR扩增的产物纯化后，以纯化后的PCR产物为模板，利用Barcode引物进行扩增，将扩增产物经纯化后得到测序文库，再对测序文库进行测序。