[发明专利]一种婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌的检测方法

权利要求书

1.一种婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌的检测方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）被检测物的增菌与克罗诺杆菌富集培养

（1.1）将100 g被检测物加入到900 mL的液体培养基Ⅰ中，37 ℃恒温培养6-8 h，得到增菌培养物；

所述的被检测物为婴幼儿配方奶粉；

液体培养基Ⅰ由15 g蛋白胨、1.5 g磷酸二氢钾、3.5 g磷酸二氢钠、0.4-0.8 g甘露醇、2.5-5.0 g海藻糖、5 g氯化钠和1000 mL水混合均匀制成；121 ℃高温灭菌15分钟；

（1.2）将10 mL增菌培养物加入到90 mL的液体培养基Ⅱ中，37 ℃恒温培养10 h，得到富集培养物；

所述液体培养基Ⅱ由15 g蛋白胨、1.5 g磷酸二氢钾、3.5 g磷酸二氢钠、0.4-0.8 g甘露醇、2.5-5.0 g海藻糖、80-150 g蔗糖、5 g氯化钠、0.3-0.6 g脱氧胆酸钠、4-8 mg万古霉素和1000 mL水混合均匀制成；

所述万古霉素为浓度10 mg/mL的盐酸万古霉素溶液；

（2）富集培养物中克罗诺杆菌的选择性分离

用接种环挑取一环富集培养物，无菌操作划线接种到20 mL的固体培养基表面，37 ℃恒温培养20-24 h，得到固体培养物，固体培养物为蓝绿色菌落，即疑似克罗诺杆菌；

所述固体培养基由12-15 g蛋白胨、5 g氯化钠、15 g琼脂粉、0.5-1.0 g脱氧胆酸钠、0.1-0.2 g 5-溴-4-氯-3-吲哚-ɑ-葡萄糖苷和1000 mL水混合均匀制成；

121 ℃高温灭菌15分钟；

（3）生化鉴定

挑取固体培养物，按照国家食品安全标准GB4789.40-2016，运用生化检测试剂盒进行鉴定，生化鉴定结果如下：氧化酶阴性（-）、L-赖氨酸脱羧酶阴性（-）、L-鸟氨酸脱羧酶阳性（+）、L-精氨酸双水解酶阳性（+）、柠檬酸水解阳性（+）、发酵L-鼠李糖（+）、D-蔗糖（+）、D-蜜二糖（+）、苦杏仁甙（+）为阳性、D-三梨醇发酵阴性（—），则判定为婴幼儿配方奶粉中含有克罗诺杆菌或者婴幼儿配方奶粉被克罗诺杆菌污染；反之，判定为婴幼儿配方奶粉中不含有克罗诺杆菌或者婴幼儿配方奶粉没有被克罗诺杆菌污染。