[发明专利]一种基因、重组载体、工程菌及其应用

权利要求书

1.一种柠檬烯合酶LS基因，其特征在于，所述柠檬烯合酶LS基因选自如下a1)或a2)所示的DNA片段；

a1)编码链的编码序列是SEQ ID NO.1所示的DNA片段；

a2)与a1)限定的DNA片段具有90％或以上同一性且编码具有相同功能的蛋白质的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的柠檬烯合酶LS基因，其特征在于，所述a1)为：

a1)序列是SEQ ID NO.1所示的DNA片段。

3.一种橙花基焦磷酸合酶NPPS基因，其特征在于，所述橙花基焦磷酸合酶NPPS基因选自如下A1)或A2)所示的DNA片段；

A1)编码链的编码序列是SEQ ID NO.2所示的DNA片段；

A2)与A1)限定的DNA片段具有90％或以上同一性且编码具有相同功能的蛋白质的DNA片段。

4.根据权利要求3所述的橙花基焦磷酸合酶NPPS基因，其特征在于，所述A1)为：

A1)序列是SEQ ID NO.2所示的DNA片段。

5.一种重组载体I，其特征在于，所述重组载体I为在整合型骨架载体I中插入片段I；

所述片段I含有目的基因模块I；

所述目的基因模块I的核苷酸序列含有权利要求1～2任一项所述的柠檬烯合酶LS基因的核苷酸序列和权利要求3～4任一项所述的橙花基焦磷酸合酶NPPS基因的核苷酸序列。

6.根据权利要求5所述的重组载体I，其特征在于，顺着表达方向，所述目的基因模块I的核苷酸序列依次含有柠檬烯合酶LS基因的核苷酸序列和橙花基焦磷酸合酶NPPS基因的核苷酸序列；所述柠檬烯合酶LS基因的核苷酸序列和所述橙花基焦磷酸合酶NPPS基因的核苷酸序列之间通过连接肽基因连接；

优选地，所述目的基因模块I的核苷酸序列还含有N-端跨膜区截短的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶HMGR基因的核苷酸序列；

优选地，顺着表达方向，所述目的基因模块I的核苷酸序列依次含有柠檬烯合酶LS基因的核苷酸序列、橙花基焦磷酸合酶NPPS基因的核苷酸序列和N截短的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶HMGR基因的核苷酸序列；

所述柠檬烯合酶LS基因的核苷酸序列和所述橙花基焦磷酸合酶NPPS基因的核苷酸序列之间、所述橙花基焦磷酸合酶NPPS基因的核苷酸序列和所述N截短的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶HMGR基因的核苷酸序列之间分别通过连接肽基因连接；

优选地，所述目的基因模块I的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示或如SEQ ID No.4的第1～4128位碱基所示；

优选地，所述片段I中，在所述目的基因模块I的核苷酸序列的上游还含有启动子I的核苷酸序列；

优选地，所述启动子I选自ARA、GPD、TEF2、XYL中的任一种；

优选地，所述插入为利用片段I替换所述整合型载体I的ECoRV识别位点和SpeI识别位点间的较小片段，保持整合型载体I的其它核苷酸序列不变；

优选地，所述整合型骨架载体I为农杆菌介导的双元表达载体；

优选地，所述整合型骨架载体I选自Gateway Vector pB4GWnY和Takara pRI中的任一种。

7.一种工程菌，其特征在于，所述工程菌通过将重组载体A转化到宿主细胞中得到；

所述重组载体A包括权利要求5～6任一项所述的重组载体I。