[发明专利]一种基于CYP82E4基因表达水平筛选硃砂烟植株的方法

权利要求书

1.筛选硃砂烟植株的基因，其特征在于，所述的基因为CYP82E4基因。

2.基于权利要求1所述基因筛选硃砂烟植株的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：单株挂牌编号、叶片取样、RNA提取及cDNA合成、基因表达水平检测、套袋自交收种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤具体为：

步骤(1)单株挂牌编号：所有待筛烟草单株挂牌，并标记唯一编号；

步骤(2)叶片取样：取烟株幼嫩叶片组织0.1g左右置于液氮保存；

步骤(3)RNA提取及cDNA合成：提取叶片组织总RNA，并反转录成cDNA；

步骤(4)基因表达水平检测：根据CYP82E4基因设计特异qPCR引物，以叶片cDNA为模板进行qPCR分析，CYP82E4基因表达水平达到标准即为硃砂烟植株；

步骤(5)根据qPCR结果找到对应编号植株，套袋自交收种，获得稳定的硃砂烟遗传资源。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(4)标准为：达到内参基因Actin的1/1000及以上，即Target/Reference≥1*10^-3。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(4)特异qPCR引物为E4_CRqF1:GCAAGTGGAACACTTAACAATG、

E4_CRqR1:CCAAGATGAAAGATCTTAGGT；

NtACTIN基因作为内参，为：

NtACTINq_F_1:CTGAGGTCCTTTTCCAACCA、

NtACTINq_R_1:TACCCGGGAACATGGTAGAG。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(5)获得稳定的硃砂烟遗传资源的标准为10个后代植株，叶片的CYP82E4基因表达水平均大于1*10^-3，即Target/Reference≥1*10^-3，所有单株的烤后叶片均呈现显著的硃砂特征，表明筛选成功。

7.根据权利要求1所述基因的应用，其特征在于，该基因应用于表达水平筛选硃砂烟植株的方法。

8.根据权利要求3所述方法的应用，其特征在于，所述的方法在硃砂烟植株筛选中的应用。

9.根据权利要求5所述方法的应用，其特征在于，所述的特异qPCR引物和NtACTIN内参在硃砂烟植株筛选中的应用。