[发明专利]一种用于改善肝纤维化的组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于改善肝纤维化的组合物及其制备方法和应用。所述组合物包含有肝细胞生长因子(HGF)诱导的间充质干细胞细胞膜片与吡非尼酮改造的间充质干细胞外泌体。该组合物具有如下功能：预防肝纤维化的发生；改善肝硬化、肝癌等纤维化症状；降低血清中层粘连蛋白、透明质酸水平；促进肝脏已沉积的I型胶原的降解；降低CK18‑M30水平，抑制肝细胞凋亡；是一种安全性好、吸收率高且能有效治疗肝纤维化的药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于改善肝纤维化的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

肝纤维化是酒精、药物、化学毒性或肝炎病毒等有害因素的作用下导致的肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤都会引发肝纤维化的过程，如果损伤因素不能去除，持续的纤维化过程会发展成为肝硬化，甚至肝癌、肝衰竭。细胞外基质(ECM)过度堆积形成瘢痕是肝纤维化形成过程中的主要特征，肝星状细胞被激活转变为肌成纤维细胞(肌成纤维细胞具有分泌细胞外基质的功能) 是肝纤维化发生的中心环节，因此抑制肝星状细胞活化增殖、阻断细胞外基质合成及促进已沉积的胶原降解是改善肝纤维化的主要途径。

肝脏移植是最终的治疗手段，但供体资源短缺，手术风险大，费用较高，如果是异体移植在移植后会出现免疫排斥，需要服用免疫抑制剂。服用药物在一定程度上也能起到保肝护肝的作用，但只能缓解肝纤维化的发展进程，并不能从根本解决纤维化问题。同时，无论是经口或经静脉输注的药物，在体内都要经过全身血液循环才能到达受损组织，靶向性差，降低了药物的生物利用率，达不到有效治疗浓度，且易对非靶器官造成毒性。干细胞及干细胞衍生物治疗是目前的新兴疗法，包括间充质干细胞单细胞悬液注射治疗及干细胞外泌体治疗。单细胞悬液注射后细胞易发生吸收、扩散，无法达到均匀分布使得修复效能较低，且注射后存在细胞数量不够细胞活性易丧失的情况。干细胞来源的外泌体在肝纤维化治疗上有一定的效果，能够抑制肝星状细胞分化为肌成纤维细胞，阻断细胞外基质的沉积，但外泌体易受受损组织微环境的影响，且不能降解已形成的胶原沉积，因此只能延缓纤维化的发展进程，并不能逆转纤维化。

综上，现有技术存在的问题是，缺乏一种安全性好且能有效治疗肝纤维化的药物。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于改善肝纤维化的组合物及其制备方法和应用。

本发明的目的是提供一种用于改善肝纤维化的组合物，包含有肝细胞生长因子诱导的间充质干细胞细胞膜片与吡非尼酮改造的间充质干细胞外泌体。

优选的，上述用于改善肝纤维化的组合物，所述的间充质肝细胞细胞膜片培养时，将间充质干细胞置于肝样细胞膜片诱导液中培养，其中肝样细胞膜片诱导液中含有肝细胞生长因子，含量为5-25μg/mL。

优选的，上述用于改善肝纤维化的组合物，所述的间充质干细胞细胞膜片的制备原料来源于低代次的骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、子宫内膜间充质干细胞中的任一种，上述任一种干细胞在体外持续培养后所获得的细胞薄膜片。

优选的，上述用于改善肝纤维化的组合物，所述的低代次的间充质干细胞细胞代数为P0-P10代。

优选的，上述用于改善肝纤维化的组合物，所述的吡非尼酮改造的间充质干细胞外泌体中，吡非尼酮的添加量为300μM/L-1000μM/L。

优选的，上述用于改善肝纤维化的组合物，所述的吡非尼酮改造的间充质干细胞外泌体来源于骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、子宫内膜间充质干细胞中的任一种。

本发明还提供了一种用于将HGF诱导过的间充质干细胞细胞膜片无菌剪碎后与吡非尼酮改造后的间充质干细胞外泌体混合。

优选的，上述用于改善肝纤维化的组合物的制备方法，包括如下步骤：