[发明专利]一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其生产方法

说明书

本发明公开一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其生产方法，属于疫苗生产技术领域。本发明提供的生产方法包括猪伪狂犬gE基因缺失病毒悬浮培养、病毒抗原液澄清、灭活后浓缩纯化和乳化配苗步骤，该方法能够实现猪伪狂犬gE基因缺失病毒大量增殖，提高病毒抗原含量和产量，且有效对病毒液进行灭活处理并降低配苗用抗原液中的杂蛋白含量，各步骤协作可以共同提高疫苗的稳定性、安全性和免疫效力，可以为猪伪狂犬病疫情的防控提供一种安全且免疫效力更强的疫苗产品。

技术领域

本发明属于生物医药中疫苗的制备技术领域，具体涉及一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其规模化生产方法，尤其涉及一种安全性高、免疫效果好且保存期长的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其规模化生产方法。

背景技术

伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的多种家畜和野生动物的急性传染病。PRV属疱疹病毒科、疱疹病毒亚科，水痘病毒属，具有神经嗜性但对温度、pH值均有较强抵抗力，但对消毒剂较为敏感。PRV可感染除人和无尾猿以外的哺乳动物，猪是该病的主要宿主和传染来源，对猪可呈爆发性流行，引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、增长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。

目前，疫苗免疫是控制猪场PRV疫情的主要手段，其中由于猪PRV基因缺失(尤其是gE基因缺失)灭活疫苗具有安全、免疫效果好、且能够对目前流行的猪伪狂犬病提供保护，并可用相应的ELISA试剂盒区别免疫猪和野毒感染猪等优点，而被广泛生产和应用。例如专利文献CN107267466A(以下称文献1)公开一种大规模生产猪伪狂犬病灭活疫苗的方法，其利用gE基因缺失的猪伪狂犬病毒变异株XF-1株(gE基因缺失株，CN106497890A)，并通过以下步骤规模化制备得到猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗：(1)猪伪狂犬病病毒XF-1株的制备；(2)猪伪狂犬病病毒的纯化；和(3)将高纯度的猪伪狂犬病毒灭活，经检验合格后，再与疫苗佐剂乳化，并且该文献1证明了其制备的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗对仔猪具有良好的免疫保护效果。然而该文献1制备的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗的免疫保护效果仍有不足，具体表现在：1)在一次免疫(有效病毒含量为10^7.0TCID₅₀/头份(2ml))后14天和35天检测的平均中和抗体水平(分别为1:9.6和1:45.2)较低；2)在一次免疫(有效病毒含量为10^7.0TCID₅₀/头份(2ml))后35天的攻毒实验中虽然免疫组的实验猪未出现死亡情况，但仍有2/5的实验猪出现发热(41℃)、精神沉郁、咳嗽、呼吸困难等临床表现。另外该文献1生产过程中使用具有毒性的甲醛作为灭活剂，且采用先浓缩纯化后灭活的生产顺序，其生产的疫苗存在潜在的安全风险。

童武等人利用猪伪狂犬JS-2012株的gE和gI双基因缺失的毒株(JS-2012-△gI/gE)作为疫苗毒株(猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)的制备及免疫效力评价，中国动物传染病学报，2016,24(6)：12-18，以下称文献2)也制备一种猪伪狂犬基因缺失灭活疫苗，并证明该灭活疫苗能够有效抵抗伪狂犬病毒变异株(JS-2012株)及经典伪狂犬病毒强毒株(SC株)的攻击。然而该文献2制备的猪伪狂犬基因缺失灭活疫苗的免疫保护效果和安全性方面均有不足，具体表现在：1)疫苗接种后会出现个别仔猪短暂性厌食；2)在一次免疫(2ml/头份)的攻毒试验中，有2头猪d3天开始发病，表现精神沉郁、厌食和身体持续性颤栗，其余3头猪有发热(41℃)，保护率仅为60％；2)在二次免疫(每次2ml/头份)的攻毒试验中，虽然保护率为100％，但是实验猪出现发热(超过40.5℃持续4天)。

因此，依然很有必要开发免疫效果更好的猪伪狂犬基因缺失灭活疫苗，对于有效控制伪狂犬疫情及伪狂犬净化具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的一个或多个问题，本发明一个方面提供安全性高、免疫效果好、保存期长的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其规模化生产方法。具体技术方案如下所示。