[发明专利]核酸稀释液

说明书

本公开涉及一种核酸稀释液，包含1×TE、F68和选自下组的DNA：Lambda DNA、pUC19质粒DNA、pUC18质粒DNA、pBR322质粒DNA、变性鱼精DNA、pUC57质粒DNA、pTZ19R DNA、大肠杆菌DNA以及sssDNA。本公开的核酸稀释液可用于定量PCR中标准品和样品的稀释，具有保护和稳定标准品和样品的作用。本公开还涉及用该核酸稀释液制备的标准品溶液以及使用该标准品溶液的定量PCR方法。

技术领域

本公开属于生命分析领域。具体地，本公开涉及一种核酸稀释液，其可用于定量PCR中标准品和样品的稀释。本公开还涉及用该核酸稀释液制备的标准品溶液以及使用该标准品溶液的定量PCR方法。

背景技术

定量PCR是一种可测定PCR产物量的方法，可在宽的浓度范围内以高精度定量样品的初始模板拷贝数或浓度。定量PCR具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点，在生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析、SNP检测、等位基因的检测、药物开发、临床诊断、转基因研究等得到了广泛的应用。

定量PCR分析法利用梯度稀释的一组标准品制作标准曲线，建立Ct值与浓度之间的线性关系。得到待测样品的Ct值后，利用标准曲线可以换算出待测样品的量。通常，用水或者TE作为稀释液来对标准品进行梯度稀释或对待测样品进行稀释。但是，这样制备得到的标准品或样品(特别是低浓度的标准品或样品)往往不稳定，无法长期保存。使用传统稀释液稀释的标准品或样品在制备后仅几个小时就会失效，因此需要在每次定量PCR实验前新鲜配制稀释的标准品和样品。

因此，为了使稀释后的标准品和/或样品能够长期稳定存储，需要获得具有稳定标准品和/或样品作用的稀释液。

发明内容

鉴于现有技术的上述不足，在第一方面，本公开提供一种核酸稀释液，包含1×TE、F68和选自下组的DNA：Lambda DNA、pUC19质粒DNA、pUC18质粒DNA、pBR322质粒DNA、变性鱼精DNA、pUC57质粒DNA、pTZ19R DNA、大肠杆菌DNA以及sssDNA(minus-strand strong-stopDNA)。该核酸稀释液可作为标准品或样品的稀释液，具有保护和稳定标准品或样品的作用。用该稀释液稀释的标准品或样品可在较长时间内存储而不会失效。

在一个实施方式中，F68的浓度为0.001-0.05％，优选0.002-0.04％，更优选0.003-0.03％。在一个优选实施方式中，F68的浓度为0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％或0.05％。当F68在上述浓度范围内时，可以提供更好的保护和稳定作用。

在一个实施方式中，DNA的浓度为3-30ng/μl，优选4-25ng/μl，更优选5-20ng/μl。

在一个优选实施方式中，DNA的浓度为3ng/μl、4ng/μl、5ng/μl、6ng/μl、7ng/μl、8ng/μl、9ng/μl、10ng/μl、15ng/μl、20ng/μl、25ng/μl或30ng/μl。当DNA在上述浓度范围内时，可以提供更好的稳定效果，有利于降低标准品或样品的在容器上的吸附损失。

在一个优选实施方式中，DNA为Lambda DNA。

在第二方面，本公开提供一种标准品溶液，其中，所述标准品溶液通过用上述核酸稀释液稀释标准品原液获得，所述标准品溶液的浓度低于标准品原液。

在一个实施方式中，标准品为用于DNA样品定量的标准品或用于RNA样品定量的标准品。在一个实施方式中，用于DNA样品定量的标准品选自基因组DNA、质粒和PCR产物。在一个实施方式中，用于RNA样品定量的标准品选自体外转录RNA、PCR产物和质粒。