[发明专利]一种α亚基突变的腈水合酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种腈水合酶的α亚基突变体，其特征在于，由野生型α亚基序列经突变所得，野生型α亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变位点为以下任一组：

(1)第105位丙氨酸突变为天冬氨酸、第122位丝氨酸突变为缬氨酸；

(2)第71位丙氨酸突变为天冬氨酸、第105位丙氨酸突变为天冬氨酸、第122位丝氨酸突变为缬氨酸；

(3)第30位丝氨酸突变为苏氨酸、第46位缬氨酸突变为异亮氨酸、第71位丙氨酸突变为天冬氨酸、第74位丙氨酸突变为天冬氨酸、第78位丙氨酸突变为精氨酸、第79位天冬酰胺突变为天冬氨酸、第81位丝氨酸突变为苏氨酸、第92位缬氨酸突变为精氨酸、第96位天冬氨酸突变为组氨酸、第97位苏氨酸突变为甲硫氨酸、第105位丙氨酸突变为天冬氨酸、第122位丝氨酸突变为缬氨酸、第133位丙氨酸突变为脯氨酸、第179位丙氨酸突变为谷氨酸。

2.一种α亚基突变的腈水合酶突变体，其特征在于，包括α亚基和β亚基，其中，所述α亚基为权利要求1所述的α亚基突变体。

3.如权利要求2所述的腈水合酶突变体，其特征在于，β亚基的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.一种用于表达权利要求2所述腈水合酶突变体的基因簇，其特征在于，所述基因簇包括分别编码α亚基突变体、β亚基以及调控蛋白p14K的基因序列。

5.如权利要求4所述的基因簇，其特征在于，编码α亚基突变体的基因序列如SEQ IDNO.7～9任一所示，编码β亚基的基因序列如SEQ ID NO.10所示，编码调控蛋白p14K的基因序列如SEQ ID NO.11。

6.如权利要求5所述的基因簇，其特征在于，编码α亚基突变体的基因序列与编码β亚基的基因序列之间具有第一连接序列，第一连接序列的序列为：GGAGATCATC；编码β亚基的基因序列与编码调控蛋白p14K的基因序列之间具有第二连接序列，第二连接序列的序列为：TC。

7.包含权利要求4～6任一所述基因簇的重组表达载体。

8.包含权利要求7所述重组表达载体的基因工程菌。

9.如权利要求3所述的腈水合酶突变体在催化丙烯腈生产丙烯酰胺中的应用。

10.如权利要求8所述的基因工程菌在催化丙烯腈生产丙烯酰胺中的应用。