[发明专利]核酸分子、PCR引物对及用于检测禽毛滴虫rpoB基因的试剂盒

说明书

本发明公开了一种核酸分子、PCR引物对及用于检测禽毛滴虫rpoB基因的试剂盒。发明人通过长期研究，在禽毛滴虫中克隆得到如SEQ ID NO:1所示的禽毛滴虫rpoB全长基因编码序列，并利用该rpoB全长基因编码序列进一步设计得到能够检测禽毛滴虫rpoB基因及其转录水平的PCR引物对和相应的PCR反应条件，进而组装成用于检测禽毛滴虫rpoB基因的试剂盒，从而可以满足寄生生物学、生命科学研究者的检测需要，以及促进对该病原的基因水平检测及其致病机制研究的进展，为基因功能研究和药物开发等研究工作提供有利技术支撑。上述PCR引物对重复性高，特异性强，灵敏度高，对非目的基因没有扩增信号。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，尤其是涉及一种核酸分子、PCR引物对及用于检测禽毛滴虫rpoB基因的试剂盒。

背景技术

我国养鸽历史悠久，将鸽子作为商品生产也有100多年历史，现阶段肉鸽养殖业已经遍布我国各个地区，并且规模不断壮大，鸽感染性疾病的有效防控也越发重要。其中，鸽毛滴虫病(又称“鸽癀”)也是养鸽场高发的消耗性寄生虫病，对肉鸽生产性能和幼鸽存活率均具有重要危害性。最常见的特征变化是口腔和咽喉黏膜形成粗糙钮扣状的黄色沉着物；湿润者，称为湿性溃疡；呈干酪样或痂块状则称为干性溃疡。脐部感染时，皮下形成肿块，呈干酪样或溃疡性病变；波及内脏器官时，便引起黄色粗糙界线明显的干酪样病灶，结果导致实质器官组织坏死。病鸽因口腔溃疡而妨害采食，在幼鸽和生长期鸽中可引起很高的死亡率。鸽毛滴虫病的病原是禽毛滴虫，属鞭毛亚门，动鞭毛纲，多鞭毛目，毛滴虫科，毛滴虫属。实验室诊断一般通过显微镜检查口腔、食道、嗉囊分泌物涂片发现虫体，或刮取病变处黏液制成涂片，染色镜检见到典型虫体。禽毛滴虫虫体呈瓜子形或梨形，虫体前端有毛基体伸出4根鞭毛，使虫体可迅速移动。在虫体的一侧有波动膜，其起始于虫体的前端，终止于虫体稍后方虫体前部有1椭圆形的核，虫体前部与波动膜相对，一侧有胞口，虫体中央有一根细长的轴柱自前向后伸延至虫体后缘之外。虫体凭借在体液中作螺旋式运动，以分裂方式增殖，约4小时便可增殖一世代。目前对于该病原的致病机制研究仍很少，究其原因，在于缺乏有效的基因水平检测手段。

聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。其中，荧光定量PCR是一种常见的核酸定量技术，也是低成本，重复性高，便于操作的基因水平检测手段。该技术在PCR反应系统中引入了SYBR、TB Green等核酸荧光标记物质，通过检测每个热循环后PCR反应体系中的荧光值的增加情况，进而实时监测PCR的扩增情况，并拟合出每个样本的荧光定量变化曲线，从而获得每个反应管的Ct值(荧光变化达到阈值时的循环数)，以起始模板数的对数为横坐标，以Ct值为纵坐标制备标准曲线，据此标准曲线和各个标本的Ct值对每个反应的起始DNA模板数进行定量测定。

rpoB蛋白(DNA-directed RNA polymerase,beta subunit)是RNA聚合酶的β亚基，参与RNA合成，是一个重要药物靶标，譬如利福平靶标抑制结核分枝杆菌rpoB基因，进而抑制细菌生长。另外，该基因广泛存在于真核和原核生物中，但在不同生物中，编码基因序列存在序列差异，所以也是一个有效的遗传分型标签。而且，检测rpoB基因及其转录水平，可以为基因功能研究和药物开发等研究工作提供有利技术支撑。

但是，目前禽毛滴虫的rpoB基因未有公开报道，阻碍了对该病原的基因水平检测及其致病机制研究的进展。

发明内容

基于此，有必要提供一种展示禽毛滴虫的rpoB全长基因编码序列的核酸分子。

一种核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了一种PCR引物对，所述PCR引物对能够通过PCR扩增反应检测如上所述的核酸分子。