[发明专利]用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的引物探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的引物探针组合，其特征在于，包括以下引物探针组：

用于检测海洋鱼类成分的引物探针组1，所述引物探针组1包括引物1-2和探针1，其中，所述引物1-2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示，所述探针1的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；

用于检测三文鱼成分的引物探针组2，所述引物探针组2包括引物4-5和探针2，其中，所述引物4-5的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4-5所示，所述探针2的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示；

用于检测植物成分的引物探针组3，所述引物探针组3包括引物7-8和探针3，其中，所述引物7-8的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7-8所示，所述探针3的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的引物探针组合，其特征在于，所述探针1、所述探针2和所述探针3的5’端设有报告荧光基团，所述探针1、所述探针2和所述探针3的3’端设有淬灭荧光基团。

3.根据权利要求2所述的用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的引物探针组合，其特征在于，所述探针1、探针2和探针3的5’端用报告荧光基团为FAM、Hex、Tet、Joe、Vic、Fite、Cy3和Cy5其中的一种标记；所述探针1、探针2和探针3的3’端用淬灭荧光基团MGBNFQ、Tamra、Rox、Dabcy、Bhq1和Bhq2其中的一种标记。

4.根据权利要求1所述的用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的引物探针组合，其特征在于，各引物应用于PCR反应中的终浓度为0.6μmol/L；各探针应用于PCR反应中的终浓度为0.2μmol/L。

5.权利要求1-4所述的引物探针组合在检测深海鱼油中掺杂异源油酯的应用。

6.权利要求1-4所述引物探针组合在制备检测深海鱼油中掺杂异源油酯的试剂或试剂盒中的应用。

7.一种用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一所述的引物探针组合。

8.根据权利要求7所述用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光定量PCR反应的其他试剂。

9.根据权利要求8所述用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照、空白对照；

所述阳性对照为以三文鱼和植物作为样本DNA，用权利要求1所述的引物进行扩增，并用权利要求1所述的探针检测混合的DNA片段，DNA的浓度为大于等于5ng/μL且小于等于100ng/μL；

所述阴性对照为以非海洋鱼类DNA及植物源性DNA或双蒸水；

所述空白对照包括两个，一为DNA提取后承载DNA介质的空白对照，二是PCR反应过程中的双蒸水空白对照。

10.检测深海鱼油中掺杂异源油脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从鱼油中提取DNA；

(2)以18SrRNA作为内参基因，进行扩增；

(3)采用权利要求7、8或9任一所述用于检测深海鱼油中掺杂异源油脂的试剂盒构建反应体系，反应条件为：50℃预热20-40min；95℃变性5-15min；95℃10-20s、58℃0.5-2min，共45个循环；收集荧光信号，反应完成后，分析反应结果。

11.根据权利要求10所述检测深海鱼油中掺杂异源油酯的方法，其特征在于，探针1的5’端用报告荧光基团为FAM，探针2的5’端用报告荧光基团为VIC，探针3的5’端用报告荧光基团为HEX，探针1、探针2和探针3的3’端用淬灭荧光基团为MGB；结果判定的条件包括：

①质控标准：阳性对照的FAM、VIC、HEX荧光信号有荧光对数增长，且Ct值≤30.0；阴性对照和空白对照无荧光对数增长或Ct值≥40.0；

②阳性样品：当①成立时，FAM有荧光对数增长，且Ct值≤35.0，表明该样品检出海洋鱼类成分；或/和

VIC有荧光对数增长，且Ct值≤35.0，表明该样品检出三文鱼成分；或/和

HEX有荧光对数增长，且Ct值≤35.0，表明该样品检出植物成分；

③阴性样品：当①成立时，FAM无荧光对数增长，或Ct值≥40.0，表明该样品未检出海洋鱼类成分；或/和

VIC无荧光对数增长，或Ct值≥40.0，表明该样品未检出三文鱼成分；或/和

HEX无荧光对数增长，或Ct值≥40.0，表明该样品未检出植物成分；

④疑似样品：当①成立时，FAM有荧光对数增长，且35.0Ct值40.0，重复检测一次；复检结果Ct值≥40.0，表明该样品未检出海洋鱼类成分；复检结果Ct值40.0，表明该样品检出海洋鱼类成分；或/和

VIC有荧光对数增长，且35.0Ct值40.0，重复检测一次；复检结果Ct值≥40.0，表明该样品未检出三文鱼成分；复检结果Ct值40.0，表明该样品检出三文鱼成分；或/和

HEX有荧光对数增长，且35.0Ct值40.0，重复检测一次；复检结果Ct值≥40.0，表明该样品未检出植物成分；复检结果Ct值40.0，表明该样品检出植物成分。