[发明专利]杨梅雌雄性别鉴定的特异性核苷酸片段及分子标记

说明书

本发明涉及一种杨梅雌雄性别鉴定的特异性核苷酸片段，该片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了扩增该特异性片段的上下游引物序列为：上游序列F：TTCCGCTATCCTCTTCC(SEQ ID No.2)；下游序列R：AACTACATTGGGTGCTTAC(SEQ ID No.3)。本发明提供的一种分子标记，可实现准确、快速、简单、低成本的杨梅雌雄性别鉴定，对加快育种进程和实现分子育种具有重要意义，目前此引物已在雌、雄样本各40的群体中成功扩增，鉴别准确率为100％。

技术领域

本发明属于植物分子生物学领域，涉及一种杨梅雌雄性别鉴定的特异性核苷酸片段及分子标记。

背景技术

杨梅(Myrica rubar Sieb.et Zucc.)是我国的特色果树，果实风味独特，营养丰富，含有杨梅苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和异槲皮苷等多种功能性物质，具有较高的经济价值，已成为我国南方山区农民脱贫致富的重要树种。杨梅为雌雄异株植物，其性别决定为雌性杂合，属ZW性别决定系统，花序为柔荑花序。雄株始花期在3月上旬，较雌株提前20天左右，不结果，不能产生经济效益；雌株为结果树，始花期为4月初，成熟期主要集在6月中下旬的15天左右。随着消费者对杨梅保健功能的认识，其地位也逐渐提高，对杨梅育种也提出了新的挑战。近年来，随着生物分子技术的不断进步，分子育种在动植物种质创新中的重要性已日益凸显，杨梅分子辅助育种也已逐渐实现，分子标记是实现分子辅助育种和缩短育种周期的必要手段。

杨梅童期长(杂交实生苗童期长达10年左右)，童期时雌雄植株表现无差异，无法通过常规表型或酶活等指标对雄株进行鉴定，给杂交育种或实生选育等工作带来困难，增加育种成本和工作量。因此设计一种特异性分子标记实现准确、快速、简单、低成本的雌雄性别鉴定，对加快杨梅育种进程和实现分子育种具有重要意义。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种杨梅雌雄性别鉴定的特异性核苷酸片段。

本发明的第二目的是提供扩增上述片段的特异性引物，为杨梅的雌雄性别鉴定提供一种快速手段。

本发明通过以下技术方案来实现：

一、一种杨梅雌雄性别鉴定的特异性核苷酸片段，该片段的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。

二、根据上述的特异性核苷酸片段，扩增该片段的上下游引物序列为：

上游序列F：TTCCGCTATCCTCTTCC(SEQ ID No.2)；

下游序列R：AACTACATTGGGTGCTTAC(SEQ ID No.3)。

采用上述技术方案的积极效果：本发明提供了一种分子标记，可实现准确、快速、简单、低成本的杨梅雌雄性别鉴定，对加快育种进程和实现分子育种具有重要意义，目前此引物已在雌、雄样本各40的群体中成功扩增，鉴别准确率为100％。

附图说明

图1是PCR扩增结果示意图；

图2是核苷酸片段在NCBI数据库的比对结果示意图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但不应理解为对本发明的限制：

实施例1

本实施例说明简化CTAB法提取杨梅叶片DNA。

(1)天平秤取0.5g杨梅幼嫩叶片置于2ml离心管中，放液氮中冷冻10min，将离心管取出，由组织磨样机进行磨样；

(2)在离心管中加入600ul预热的CTAB裂解液(65℃)(表1)，充分混匀后，65℃水浴30～60min；