[发明专利]一种具有信号放大效应的可视化检测爆炸物分子的生物传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有信号放大效应的可视化检测爆炸物分子的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）IspA基因片段经扩增、纯化回收，pACYC-MvaE-MvaS质粒经双酶切、纯化回收后，将质粒酶切片段与IspA基因片段进行无缝连接，连接产物转化感受态细胞，筛选阳性克隆，得到重组质粒pACYC-mvaE-mvaS-IspA；

（2）分别扩增启动子yqjfC55、T7 RNA聚合酶基因以及pACYC-mvaE-mvaS-IspA载体片段，然后将三者扩增产物进行无缝连接，连接产物转化感受态细胞，筛选阳性克隆，得到重组质粒pACYC-mvaE-mvaS-IspA-yqjfC55-T7RNAP；

所述启动子yqjfC55来源于大肠杆菌Escherichia coli，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述T7 RNA聚合酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述启动子yqjfC55能够启动T7 RNA聚合酶基因的转 录；

（3）将重组质粒pACYC-mvaE-mvaS-IspA-yqjfC55-T7RNAP、甲羟戊酸途径下游表达载体和番茄红素合成基因质粒共转化感受态细胞，筛选到阳性克隆，获得工程菌株XLYC3，即为生物传感器；

所述重组质粒pACYC-mvaE-mvaS-IspA-yqjfC55-T7RNAP能够外源表达乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE、3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS以及法呢基/香叶基焦磷酸合酶IspA；所述甲羟戊酸途径下游表达载体能够外源表达甲羟戊酸激酶基因ERG12，磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG8，甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因ERG19和异戊烯焦磷酸异构酶基因IDII；所述番茄红素合成基因质粒能够表达番茄红素合成所需的香叶基香叶基焦磷酸合成酶基因crtE、八氢番茄红素合成酶基因crtB和八氢番茄红素去饱和酶基因crtI。

2.权利要求1所述的制备方法制备得到的生物传感器。

3.权利要求2所述的生物传感器在用于爆炸物分子的可视化检测中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述生物传感器的使用方法为：将生物感应器培养活化后，加入待测样品后继续培养，观察培养液颜色变化；若培养液不呈现红色，则说明待测样品中不存在爆炸物分子，若培养液呈现红色，则说明待测样品中具有爆炸物分子，并且培养液红色越明显即说明待测样品中的爆炸物分子的浓度越高。