[发明专利]一种DNA连接的方法及其应用

权利要求书

1.一种DNA连接用片段，其包括第一DNA片段和/或第二DNA片段，其中：

第一DNA片段选自如下所示核苷酸序列形成的多核苷酸片段：

X1-BAGATCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGTGCAT-X3-ATGCACACTCTTTCC CTACACGACGATCT，

第二DNA片段选自如下所示核苷酸序列形成的多核苷酸片段：

TCTAGTGTGCAGACTTGAGGTCAGTGGCAT-X6-ATGCCACTGACCTCAAGT CTGCACACTAGAB-X8；

或者，

第一DNA片段选自如下所示核苷酸序列形成的多核苷酸片段：

X1-BAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAAC-X3-GTTCAGACGTGTGCTCTTC CGATCT，

第二DNA片段选自如下所示核苷酸序列形成的多核苷酸片段：

TCTAGCCTTCTCGCAGCACATCCC-X6-GGGATGTGCTGCGAGAAGGCTAG AB-X8；

其中，X1为12-50个任意核酸N；

X3为6-15个T碱基；

X6为6-15个T碱基；

X8为12-50个任意核酸N。

2.根据权利要求1所述的DNA连接用片段，其中，第二DNA片段5’端带有磷酸化修饰，3’端带有封闭基团修饰。

3.权利要求1-2任一项所述的DNA连接用片段作为接头用于DNA定量测定或构建测序文库中的DNA连接的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其中，DNA连接时按照3’端至5’端的顺序形成第一DNA片段-待测DNA-第二DNA片段的结构。

5.一种DNA连接方法，该方法包括：

将待测DNA经过酶切后，在DNA连接酶的作用下与权利要求1-2任一项所述的DNA连接用片段进行连接。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，DNA连接时按照3’端至5’端的顺序形成第一DNA片段-待测DNA-第二DNA片段的结构。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，酶切时选用Tn5转座酶、Fragmentase、DNase I、Endonuclease V中的一种或多种DNA内切酶；

DNA连接酶选自HiFi Taq DNA Ligase、Taq DNA Ligase、9°N^TMDNA Ligase中的一种或多种，酶的工作浓度为0.01U/μl～0.2U/μl。

8.根据权利要求5所述的方法，其中，DNA连接用片段的工作浓度为0.01uM～0.2uM。

9.一种DNA定量测定方法，该方法包括：

按照权利要求5-8任一项所述的方法对待测DNA进行连接；

连接产物进行PCR扩增，从而进行定量测定。

10.一种DNA文库构建方法，该方法包括：

按照权利要求5-8任一项所述的方法对待测DNA进行连接；

连接产物进行PCR扩增，从而构建DNA文库。