[发明专利]一种适用于甘草膏赭曲霉毒素A的快速测定方法

说明书

本发明公开了一种适用于甘草膏中赭曲霉毒素A快速准确的检测方法。通过选择提取溶剂、优化液‑液萃取与反萃取净化、改进免疫亲和柱净化的淋洗溶液等关键控制步骤，最终获得一种适用于甘草膏中赭曲霉毒素A的快速准确检测方法。当提取液用体积比60：40的浓度30g/L的NaHCO₃溶液与乙腈时甘草膏完全溶解，调pH值至2‑3时用三氯甲烷萃取，再用提取液反萃取技术净化，免疫亲和柱再净化后测定，简单快速，净化效果好，有效去除杂质干扰，回收率高且稳定。本发明提供的检测方法用于甘草膏中赭曲霉毒素A的检测，回收率9高达0％，有效解了决现有方法难以快速准确测定甘草膏中赭曲霉毒素A的问题，建立了一种低成本快速准确的甘草膏中赭曲霉毒素A含量的测定方法。

发明领域

本发明涉及一种赭曲霉毒素A的检测方法，特别涉及一种适用于甘草膏中赭曲霉毒素A的快速检测方法。

背景技术

中药材在采收,加工,运输和储藏等过程中，受其自身因素和外界环境条件的影响均可能侵染多种真菌尤其产毒真菌，可能产生具有严重毒副作用的真菌毒素，进而影响中药及其产品的质量和安全性。真菌毒素对机体不表现出急性毒性，但在体内有较强的蓄积性，损害肝肾功能，严重威胁人类的身体健康,甚至生命安全。中药材种类繁多，霉变情况各异，真菌毒素的污染和残留水平及对药材质量的影响也差异较大。

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，简称OTA)是赭色曲霉属和青霉属的几种真菌产生的有毒代谢产物，OTA的分子量为403.8，熔点169℃，为无色晶体，易溶于极性有机溶剂和稀碳酸氢钠溶液，微溶于水。在紫外光下呈绿色荧光,最大吸收峰为333nm。该化合物相当稳定,一般的烹调和加工方法只有部分破坏，对人及多种动物具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性、致畸毒性和致癌性，国际癌症研究机构IARC将其确定为2B类致癌物。赭曲霉毒素是真菌毒素之一，是由纯绿青霉、赭曲霉及碳黑曲霉等产毒菌株侵染粮食、食品、饲料及其他农副产品后所产生的一种有毒代谢产物。同时赭曲霉毒素广泛存在于各种食物中，存在于谷物及其副产品、可可、咖啡、肉类、乳汁、干果、调味品、酒类、茶叶等中。目前，世界上有40多个国家和地区规定了粮食及其制品、果酒、干果及婴幼儿食品中OTA的限量。OTA与人类健康关系较为密切，是欧洲部分国家膳食中的主要污染物之一，因此受到全世界的广泛关注。

甘草为豆科植物甘草的干燥根和根茎，是一种常用的中药材。甘草在采收，加工，运输和储藏等过程中很易产生真菌毒素赭曲霉毒素A，甘草膏是甘草的浸汁浓缩产物，有微弱的特臭和持久的特殊甜味，黑褐色的固体。甘草膏的主要成分是甘草素，又称甘草精，甘草甙或甘草甜素(Glycyrrhizin)，为甘草酸 (Glycyrrhizin Acid)的钙盐、钾盐或钠盐。甘草膏中赭曲霉毒素A的残留量远远大于甘草中残留量。甘草膏作为较大宗的出口商品，主要有于医药、烟草和食品等工业，全世界每年需求1～2万吨。因此，甘草膏中赭曲霉毒素A的测定对于其质量安全和人类健康都有重要的意义。