[发明专利]一种适用于甘草膏赭曲霉毒素A的快速测定方法

权利要求书

1.一种适用于甘草膏中赭曲霉毒素A的快速测定方法，其特征在于，该测定方法具体包括如下步骤：

(1)称取样品1.0g，加入20mL的NaHCO₃水溶液和乙腈混合溶液，60℃下超声30min，第一次离心后取上清液，加入盐酸调节pH值至2-3时，加入三氯甲烷后涡旋混匀萃取；第二次离心分离后取三氯甲烷层，重复萃取一次，合并三氯甲烷约30mL，旋转蒸发至1-2mL溶液，加入20mL的NaHCO₃溶液和乙腈混合的提取液，混合后第三次离心分离，取4mL上清液待净化；

(2)将步骤(1)上清液加入PBST溶液稀释，涡旋混匀后过免疫亲和柱净化，依次用5mLPBST和5mL水淋洗免疫亲和柱后挤干，用2.5mL的浓度为2％的乙酸甲醇洗脱并收集试管中；

(3)将步骤(2)中收集试管中的流出液于40℃下氮气吹干，用0.5mL混合溶剂溶解，涡旋后过PTFE滤膜；

(4)配制标准工作溶液制作标准曲线，以外标法定量；

(5)过膜后溶液上液相色谱荧光检测器法检测。

2.如权利要求1所述的一种适用于甘草膏中赭曲霉毒素A的快速测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中NaHCO₃水溶液和乙腈的体积比为60：40，NaHCO₃水溶液的浓度为30g/L，盐酸的浓度为5mol/L；用盐酸调节pH值至2-3时加入三氯甲烷后涡旋混匀萃取两次合并，旋转蒸发至1-2mL溶液，用20mL的NaHCO₃溶液和乙腈混合的提取液来反萃取。

3.如权利要求1所述的一种适用于甘草膏赭曲霉毒素A的快速测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中PBST溶液为氯化钠8.0g、磷酸氢二钠1.2g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钾0.2g，用水溶解，调节PH至7.0，加入吐温-201mL，加水定容至1L；用5mLPBST和5mL水淋洗免疫亲和柱，用2.5mL的浓度为2％的乙酸甲醇洗脱并收集试管中。

4.如权利要求1所述的一种适用于甘草膏赭曲霉毒素A的快速测定方法，其特征在于，所述步骤(5)采用液相色谱法检测的条件为：ZORBAX SB-C18柱(4.6*150mm)色谱柱；流动相：A:浓度为2％的乙酸水溶液，C:浓度为2％的乙酸乙腈溶液。

5.如权利要求1所述的适用于甘草膏中赭曲霉毒素A的快速测定方法的应用。