[发明专利]一种重组蛋白、重组表达载体、重组细胞和NK细胞激活磁珠及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202110715596.3 | 申请日： | 2021-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN113388042B | 公开（公告）日： | 2022-02-01 |
| 发明（设计）人： | 焦顺昌;张嵘;袁翰;吕鹏敏 | 申请（专利权）人： | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/66;C12N15/85;C07K17/14;C12N5/10;C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00;A61P31/12 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 102200 北京市昌平区双*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 蛋白 表达 载体 细胞 nk 激活 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种NK细胞激活磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：诱导重组工程细胞产生重组蛋白，纯化后与激活的磁珠反应，得NK细胞激活磁珠；所述磁珠为Strep-Tactinmag.Microbeads；
所述重组工程细胞的基础细胞包括expiCHO细胞，所述重组工程细胞的基因组中包含重组表达载体，所述重组表达载体的构建方法，包括以下步骤：
(1)在真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc的Fc基因与终止密码子TGA之间添加Streptag2的编码基因序列，得载体pFUSE-hIgG1-Fc-Streptag2；
(2)将IL21-NM3E2-IgG1的编码基因插入所述载体pFUSE-hIgG1-Fc-Streptag2的NcoⅠ和BgIⅡ酶切位点之间，得所述重组表达载体，所述IL21-NM3E2-IgG1的编码基因为SEQ IDNO.4所示的核苷酸序列。
2.利用权利要求1所述制备方法制备得到的NK细胞激活磁珠。
3.权利要求2所述NK细胞激活磁珠在体外培养NK细胞中的应用。
4.一种体外培养NK细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：将人外周血单个核细胞与权利要求2所述NK细胞激活磁珠按照1:1的数量比混合后进行培养；
所述培养用的培养基以Human Lymphocytes Serum Free Media培养基为基础培养基，还包括：1000IU/mL的细胞培养因子IL-2、10ng/mL的细胞培养因子IL-15和质量百分含量为10％的胎牛血清FBS。
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