[发明专利]一种壳聚糖酶及其应用

说明书

本发明公开了一种壳聚糖酶CsnH的编码基因及其应用。本发明所述壳聚糖酶CsnH的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。与已有性质报道的壳聚糖酶序列相似度仅为67.64％。在大肠杆菌中重组表达后，壳聚糖酶产量可达665.3U/mL，本发明所述壳聚糖酶CsnH的最适反应温度为70℃，具有耐高温的特性，在80℃高温下孵育1小时仍能保持30.25％的活性，作用方式为内切，降解产物为壳二糖。可广泛应用于食品、养殖以及医药保健等行业。

技术领域

本发明涉及一种具有耐热特性的内切型壳聚糖酶CsnH的编码基因及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

壳寡糖是水解壳聚糖后，得到的聚合度小于20，分子量小于3900的寡糖。其由N-乙酰-D-氨基葡萄糖(GLcNAc)和D-氨基葡萄糖(GLcN)通过β-l,4-糖苷键连接而成。壳寡糖因其多种生物活性而受到广泛关注，它们不仅水溶性，而且无毒，具有抗凝、抗氧化、炎症反应、免疫刺激、抗菌、抗癌等功能。这使得壳寡糖在食品、养殖以及医药保健等领域有了更大的应用价值。

壳寡糖可以通过物理方法(超声波处理、紫外线辐射和微波处理)、化学方法(酸水解、过氧化氢氧化)和酶法(特异性酶和非特异性酶)制备。酶降解法具有反应条件温和、反应过程容易控制等优点，且产物纯度较高，利用基因工程构建高产壳聚糖酶的工程菌是工业化制备壳寡糖的有效途径。目前，报道的壳聚糖酶活力较低，且不耐高温，严重限制了其工业化应用前景。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种新型壳聚糖酶CsnH及其制备方法。本发明所述壳聚糖酶CsnH的最适反应温度为70℃，最适反应pH为5.5；其具有耐高温的特性，在80℃的高温下孵育1小时仍能保持30.25％的活性，利于解决催化过程中酶的稳定性和酶解效率的问题。该酶降解方式为内切，酶解主产物为壳二糖。

一方面，本发明提供一种新型壳聚糖酶CsnH，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

MVYLSARTLALVACVLSLLELGAPVPNLRTRTVAVAVGGLLIASGAIAGTAAQANAVSSLAPAITAVSAASTGDLSAPAKKEIAMQLVCSAEGNGQKLRCHNLVWHNQLPNWVTSGSWTNETLLAAQYGYIEDIDDDRGYTGGIIGFTSGTGDMLELVQNYANTKPDNNVLKPGAKIDGVGLQSHFIVGSTPSQSAQAQKYVDAWHQAAKDSVFLKEQDKLRDSMYFNPAVSQGKDSNMSNLGQFMYYDAIFMHGPGDSSDSFGGIRKSAMKNAYTAAAQGGDEKTYLQAFATARKKIMKQENAHSDTSRVDDAQLKFAVAQHWGQCGGQGWTGATSCATGYICTFVNDWYYEIK。

另一方面，本发明还提供一种新型壳聚糖酶CsnH对应的核酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：