[发明专利]一种西藏环状病毒、版纳病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可视化检测试剂盒

权利要求书

1.一种西藏环状病毒、版纳病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可视化检测试剂盒，其特征在于，包括引物组、显色物质、阳性对照和阴性对照；

所述引物组包括用于检测TIBOV的特异性RT-LAMP引物组、用于检测BAV的特异性RT-LAMP引物组和用于检测MSV的特异性RT-LAMP引物组；

其中，用于检测TIBOV的特异性RT-LAMP引物组，包括以下6条引物：

TIBOV-F3：5’-gaggataaacctacagaggaa-3’（SEQ ID NO.1）；

TIBOV-B3：5’-tctccttttctttcttgacatt-3’（SEQ ID NO.2）；

TIBOV-FIP：5’-ttctcctttttctgtttgctctcttgggaaagagaaacagattggt-3’（SEQ IDNO.3）；

TIBOV-BIP：5’-gaagattcggtggtggaaaaagattgattaggtttagcgtgct-3’（SEQ ID NO.4）；

TIBOV-Floop：5’-ccttccgctcttcatctacctc-3’（SEQ ID NO.5）；

TIBOV-Bloop：5’-ggtacgtgcggcgaaagca-3’（SEQ ID NO.6）；

用于检测BAV的特异性RT-LAMP引物组，包括以下5条引物：

BAV-F3：5’-acataatttcgctaggagtcaa-3’（SEQ ID NO.7）；

BAV-B3：5’-gtccattctcttttaaatcgttac-3’（SEQ ID NO.8）；

BAV-FIP：5’-attacgaagcgtgggtcgtggcttgccgcttaactttg-3’（SEQ ID NO.9）；

BAV-BIP：5’-acttcttgatttccagcatcagtcacaaatcttttgtattgctcg-3’（SEQ IDNO.10）；

BAV-Floop：5’-accctcacaacccacagttt-3’（SEQ ID NO.11）；

用于检测MSV的特异性RT-LAMP引物组，包括以下5条引物：

MSV-F3：5’-agatggaagaaatgccaact-3’（SEQ ID NO.12）；

MSV-B3：5’-aactcacgttttaaatcgtttg-3’（SEQ ID NO.13）；

MSV-FIP：5’-acatttcaccacttcgtttgtcaataagcgtatttacccggttc-3’（SEQ ID NO.14）；

MSV-BIP：5’-agtgttgacagatgaaatgatggatggtatcttggcgacagt-3’（SEQ ID NO.15）；

MSV-Floop：5’-atgatcagcaggtgctgttg-3’（SEQ ID NO.16）。

2.根据权利要求1所述的西藏环状病毒、版纳病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可视化检测试剂盒，其特征在于，所述显色物质为钙黄绿素和氯化锰。

3.根据权利要求1所述的西藏环状病毒、版纳病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可视化检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为TIBOV、BAV和MSV的重组质粒；阴性对照为DEPC处理ddH₂O。

4.根据权利要求3所述的西藏环状病毒、版纳病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可视化检测试剂盒，其特征在于，TIBOV、BAV和MSV的重组质粒制备方法为：利用TIBOV的SEQID NO.1和SEQ ID NO.2引物、BAV的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8引物、MSV的SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13引物，分别对TIBOV、BAV和MSV的RNA进行RT-PCR，将扩增产物与pMD18-T连接构建获得TIBOV、BAV和MSV的重组质粒TIBOV-CPMD、BAV-CPMD和MSV-CPMD。