[发明专利]一种检测生物分子数量的方法

权利要求书

1.一种检测生物分子数量的方法，其特征在于：通过RCA扩增样品中的生物分子得到DNA纳米球，利用电化学方法对通过具有单一孔道的基层的DNA纳米球产生的电流进行检测，计算得到样品中扩增后的DNA纳米球的数量，具体包括以下步骤：

S1、提取生物样品中的蛋白质，将其与设计好的该蛋白质的核酸适配体进行适配后，将该蛋白质核酸适配体的互补序列作为引物，与设计好的互补线性模板通过T4连接酶95℃退火10 min连接获得环形结构，以环形结构作为模板，加入phi29DNA连接酶在37℃进行RCA反应获得DNA纳米球，最后65℃加热5 min使酶灭活结束反应，得到RCA扩增产物；所述DNA纳米球直径大于100 nm；

所述蛋白质为Her 2蛋白质，Her 2 蛋白质核酸适配体序列为5'-AACCGCCCAAATCCCTAAGAGTCTGCACTTGTCATTTTGTATATGTATTTGGTTTTTGGCTCTCACAGACACACTACACACGCACA-3'；

所述互补线性模板序列为5'-ATATGTTTTACTGTTCACGTCTGAGAATCCCTAAACCC

GCCAATGCTGCTGCAGCGATACGCGTATCGCTATGGCATATCGTACGATATGCCGCAGCAGCAACACGCACACATCACACAGACACTCTCGGTTTTTGGTTTATGT-3'；

S2、采用激光刻蚀法在硅片上刻蚀孔径为500 nm的孔道，后使用Plasma对孔道表面改性，使其表面富含带负电羟基；所述孔道的深度小于孔道的直径的40倍；所述DNA连 接酶的粒径要小于孔道的直径的1/10；S3、将步骤S2得到的改性单一孔道硅片置于两个充满电解液的电解槽之间，将步骤S1扩增后的RCA产物放置其中一个电解槽中，电解槽两边分别含有一个Ag/AgCl电极，利用电压驱动力，将带负电的RCA产物驱动通过孔道，采用nanocoulterⅠ纳米库尔特粒度仪记录步骤S1得到的带负电的RCA产物全部通过孔道，得到待测生物样品中的蛋白质分子的分子数量。