[发明专利]一种天然纳米多效保鲜剂的制备方法及对花椰菜制品的保鲜应用

权利要求书

1.一种天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.通过共价修饰天然壳聚糖的方法制备内生NO型壳聚糖；

S2.使用益生菌的方法制备的天然硒纳米颗粒；

S3.通过物理吸附方法制备内生NO型壳聚糖包覆的硒纳米颗粒，即天然纳米硒-NO型壳聚糖纳米颗粒，作为天然纳米多效保鲜剂。

2.根据权利要求1所述的天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，通过共价修饰天然壳聚糖的方法制备内生NO型壳聚糖，具体包括：

将壳聚糖和氯化锂溶解于N,N-二甲基苯胺中，向体系中加入三乙胺和对甲苯磺酰氯，搅拌反应，丙酮沉淀，过滤并洗涤沉淀，真空除残留溶剂；

将产物与氯化锂加入N,N-二甲基苯胺中，继续加入三乙胺和乙二硫醇，氮气保护下，55～65℃搅拌过夜，丙酮沉淀，过滤并洗涤沉淀；

然后将重悬在含有二硫苏糖醇的N,N-二甲基苯胺中，搅拌，过滤并洗涤沉淀，真空除溶剂，之后重悬在N,N-二甲基苯胺/甲醇体系中，加入亚硝酸叔丁酯，搅拌反应10～20小时，反应结束后，使用甲醇沉淀，过滤并洗涤沉淀，真空除溶剂，制得内生NO型壳聚糖。

3.根据权利要求2所述的天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，壳聚糖与氯化锂的质量比在0.25～1：1；对甲苯磺酰氯与壳聚糖的质量比在1～10：1；1,2-乙二硫醇与壳聚糖的质量比在0.5～3：1；亚硝酸叔丁酯与壳聚糖的质量比在0.3～6：1。

4.根据权利要求2所述的天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，所述的壳聚糖与对甲苯磺酰氯在0～5℃搅拌反应20～24h；

与亚硝酸叔丁酯在20～25℃搅拌反应10～20h。

5.根据权利要求1所述的天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，使用益生菌的方法制备的天然硒纳米颗粒的制备具体包括：

将细菌培养物和Na₂SeO₃添加到LB培养基中，在发酵反应初期，使培养基的pH维持在6.5～7.5，反应结束时，以7500～15000rpm离心5～15分钟从反应混合物中分离出纳米Se，并用蒸馏水洗涤数次，得到天然硒纳米颗粒。

6.根据权利要求5所述的天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，所述的细菌为嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、格氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、约氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、费氏丙酸杆菌、粪肠球菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的天然纳米多效保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤S3中，通过物理吸附方法制备内生NO型壳聚糖包覆的硒纳米颗粒具体包括：

将天然硒纳米颗粒在100000g～200000g离心5～15min，再将其分散在含有1～5mg/mL的内生NO型壳聚糖水溶液中，经过6～12h的充分接触后，继续在100000g～200000g离心5～15min，重新分散入PBS缓冲液中，得到内生NO型壳聚糖包覆的硒纳米颗粒。

8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制备的天然纳米多效保鲜剂在熟制花椰菜贮藏保鲜中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的熟制花椰菜贮藏保鲜方法如下：花椰菜加工过程结束后，将天然纳米多效保鲜剂粉末均匀分散于熟制花椰菜中后，迅速热封包装。