[发明专利]一种他莫昔芬代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种他莫昔芬代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，检测试剂盒用于检测他莫昔芬代谢标志物CYP2D6(G1846A)和CYP19A1(rs4646CA)的基因多态性，试剂盒包括如下组分：CYP2D6(G1846A)扩增引物、CYP2D6(G1846A)测序引物、CYP19A1(RS4646CA)扩增引物、CYP19A1(RS4646CA)测序引物和阳性对照。本发明采用以多重RPA扩增和优化焦磷酸测序技术为组合对他莫昔芬疗效和不良反应风险预测相关的基因多态性进行检测，试剂盒可同时检测CYP2D6(G1846A)、CYP19A1(rs4646CA)基因多态性，为临床个性化用药给出基因角度的建议。

技术领域

本发明涉及一种他莫昔芬代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用，属于基因检测领域。

背景技术

他莫昔芬通过与雌激素竞争结合雌激素受体，从而抑制乳腺癌细胞的增殖，广泛应用于雌激素受体阳性乳腺癌的治疗。他莫昔芬主要通过其活性代谢产物4-羟他莫昔芬和吲哚昔芬发挥作用，其活性产物抑制细胞增殖的活性是他莫昔芬的100倍以上。CYP2D6活性下降可导致他莫昔芬的疗效下降。临床上发现,即使患者接受相同剂量的同种药物,治疗效果和不良反应也会存在明显差异。这种个体间的差异除了与非遗传因素如年龄、器官功能、药物的相互作用等有关外,还与编码药物的代谢酶和药物转运蛋白基因的多态性有关。

CYP2D6又称异喹胍4’-羟化酶,CYP第二亚家族中的重要成员。人群中CYP2D6 的活性呈现强代谢者(EM)、中间代谢者(IM)、弱代谢者(PM)和超强代谢者(UM) 四态分布的现象。目前已发现了CYP2D6基因的70多种遗传变异。不同突变类型对酶活性和药物代谢的影响不一。CYP2D6酶活性缺失的多态性可影响安替比林、可待因、β受体阻滞剂如美托洛尔和卡维地洛、氯丙咪嗪、去甲替林、地昔帕明、多虑平、丙咪嗪、马普替林、奥匹哌醇、三甲丙咪嗪、昂丹司琼、曲马多和他莫昔芬等的体内代谢，从而影响这些药物的疗效和不良反应的发生，临床需根据个体的基因型进行剂量的调整美国FDA建议雌激素受体阳性的乳腺癌患者在接受他莫昔芬治疗前进行CYP2D6基因型检测，以确保药物的疗效。CYP19A1基因编码的酶是细胞色素P450超家族的成员,其催化过程涉及药物代谢、胆固醇、类固醇和其他脂质合成的许多反应。CYP19A1蛋白质定位于内质网,又称为雌激素合成酶，是催化雌激素生物合成的最后步骤。

目前，对于基因多态性检测的方法有很多种，如直接测序法、芯片法、高分辨率熔解曲线法、等位基因特异性扩增法、taqman荧光探针法等。其中，测序法和芯片法，操作步骤繁琐，检测周期长，且扩增产物容易产生污染；高分辨率熔解曲线法步骤简单，特异性偏低，且对仪器设备的要求较高；等位基因特异性扩增法采用ARMS引物进行特异扩增，其引物设计难以最优化，检测条件要求严格。Taqman荧光探针法其试验成本高，对于多个基因的扩增通量不高。因此，需要建立一种简单、快速有效、价格低廉、特异性高的检测基因多态性的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种他莫昔芬代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的他莫昔芬代谢标志物的检测试剂盒的技术方案如下：

本发明的试剂盒针对CYP2D6(G1846A)、CYP19A1(rs4646CA)两个基因的多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：试剂1～试剂5。

优选地，所述设计特异性引物，如下表所示：

优选的，所述CYP2D6(G1846A)的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQID NO:2所示；所述CYP19A1(rs4646CA)的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:3～SEQID NO:4所示。