[发明专利]基于质谱技术的核酸检测方法

说明书

本发明提供了基于质谱技术的核酸检测方法，所述基于质谱技术的核酸检测方法为：根据待测核酸设计对应的核酸探针；使用金属离子标记所述核酸探针；标记有金属离子的核酸探针进入细胞内，与细胞内的待测核酸片段杂交；使用质谱技术检测单细胞，获得细胞中金属离子的含量，得到待测核酸的信息。本发明具有检测准确度高、快速等优点。

技术领域

本发明涉及核酸检测，特别涉及基于质谱技术的核酸检测方法。

背景技术

基因支持着生命的基本构造和性能，储存着生物体的全部遗传信息，生物的各种性状几乎都是基因相互作用的结果。基因虽然十分稳定，但这种稳定性是相对的，在一定条件或外在环境影响下，基因序列可能会发生改变。比如常见的病毒感染，当病毒侵入人体细胞时，就会利用人体细胞内的营养和遗传物质，将其基因组整合于细胞的基因组完成复制和增殖，因此及时检测病毒感染对于疾病的早期筛查、诊断及预后具有重要意义。

目前最常用的病毒核酸检测方法为荧光定量PCR，需要提取细胞内DNA，再进行PCR扩增，样本前处理繁杂，时间成本高。流式荧光原位杂交技术，不需要进行DNA提取和PCR扩增，实验周期短，能迅速得到检测结果。但其需要使用各种荧光基团作为待测物标签，检测过程中不同通道之间容易出现荧光串色问题，这导致流式荧光技术的检测通道受到限制，且在进行多参数检测时，调节荧光补偿则变得异常复杂。

发明内容

为解决上述现有技术方案中的不足，本发明提供了一种基于质谱技术的核酸检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

基于质谱技术的核酸检测方法，所述基于质谱技术的核酸检测方法为：

根据待测核酸设计对应的核酸探针；

使用金属离子标记所述核酸探针；

标记有金属离子的核酸探针进入细胞内，与细胞内的待测核酸片段杂交；

使用质谱技术检测单细胞，获得细胞中金属离子的含量，得到待测核酸的信息。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：

1.检测准确度高、分辨率高；

使用了质谱技术，如ICP-TOF-MS技术，检测各个单细胞的的金属离子含量，显著地提高了金属离子的检测准确度，也即提高了核酸检测的准确度；

在调试中，精准地同步调节竖直炬管和线圈的空间位置，达到每个工况下的最佳位置，获得最准确的检测数据；

实现炬管在三个维度上微调，三个方向的位置精度和重复精度可以达到0.01mm，实现炬管火焰与锥口达到最佳位置；

本发明的飞行时间质谱分析器可对更宽的离子初始位置分散实现二阶时间聚焦，质量分辨率显著提升；

2.检测效率高、灵敏度高；

无需提取DNA和扩增PCR，提高了检测效率；

采用双脉冲推斥技术可以减小对高压脉冲的技术要求；本发明专利采用正脉冲推(推斥电极)和负脉冲拉(牵引电极)的双推斥方式，高压的需求会降低一半，故上升沿较陡和脉冲波形均可得到改善；

在双脉冲推斥中间增加等电势的第一栅网和第二栅网，可减小加速区对离子调制区的电场渗透效应；

第一栅网和第二栅网直接接地，没有额外增加电压，调节难度小；

可实现对较宽的调制区，提高离子通量与灵敏度；

3.可靠性好；

炬管为竖直设置，且和线圈保持相对静止，炬管和线圈同步移动，防止炬管移动时与线圈靠的过近而烧坏炬管，解决了采样锥被烧变形的问题；