[发明专利]基于质谱技术的核酸检测方法

权利要求书

1.基于质谱技术的核酸检测方法，所述基于质谱技术的核酸检测方法为：

根据待测核酸设计对应的核酸探针；

使用金属离子标记所述核酸探针；

标记有金属离子的核酸探针进入细胞内，与细胞内的待测核酸片段杂交；

使用质谱技术检测单细胞，获得细胞中金属离子的含量，得到待测核酸的信息。

2.根据权利要求1所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，标记所述核酸探针的方式为：

在交联剂的作用下，金属离子和金属螯合剂集合；对核酸探针进行巯基修饰；

在缓冲液作用下，结合了金属螯合剂的金属离子与巯基修饰后的核酸探针结合。

3.根据权利要求1所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，所述细胞的获得方式为：

获得血样，分离后选取外周血细胞，制成单细胞悬液；

对细胞进行固定，细胞保持完整形态；

对细胞进行通透，提高细胞膜的通透性。

4.根据权利要求3所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，所述细胞的获得方式还包括：

通透后的细胞中加入封闭剂，之后去除封闭剂。

5.根据权利要求1所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，核酸探针和待测核酸片段的杂交方式为：

在杂交缓冲液作用下，标记金属离子的核酸探针与待测核酸片段杂交；

使用包含柠檬酸钠的缓冲液洗涤杂交后的细胞，去除非特异性杂交，之后使用PBS重悬细胞。

6.根据权利要求4所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，在单细胞的质谱检测中，离子化单细胞的具体方式为：

马达转动，转换模块将马达的转动转换为滑动件的直线移动；

将所述滑动件的直线移动转换为转换件的竖直移动，从而带动与所述转换件连接的承载件沿着多个导向件竖直移动，设置在所述承载件上的承载单元随着所述承载件竖直移动；炬管竖直地设置在所述承载单元上，线圈固定在所述承载单元上，并与所述炬管保持相对静止；

在水平方向上二维调节所述承载单元的位置，所述承载单元设置在二维调节单元上，所述二维调节单元设置在所述承载件上；

细胞逐个进入所述炬管内，通过所述线圈激发成等离子体，从而形成离子；

所述离子穿过采样锥后进入质谱分析单元。

7.根据权利要求1所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，在单细胞的质谱检测中，使用飞行时间质量分析器，所述飞行时间质量分析器包括推斥极、无场飞行区和检测器，所述无场飞行区包括第一入射栅网；所述飞行时间质量分析器还包括：

牵引电极，所述牵引电极和所述第一入射栅网间形成第一离子加速区；

第一栅网和第二栅网，所述第一栅网和第二栅网间电势差为零；所述推斥极和第一栅网间，以及第二栅网和牵引电极间形成第二离子加速区；离子依次穿过第一栅网、第二栅网、牵引电极、第一入射栅网和无场飞行区，被所述检测器接收。

8.根据权利要求7所述的基于质谱技术的核酸检测方法，其特征在于，所述飞行时间质量分析器还包括：

反射区，所述反射区包括第一反射场和第二反射场，所述第一反射场包括第二入射栅网和反射电极，第二反射场包括所述反射电极和反射板；从所述无场飞行区出射的离子被所述反射区反射，之后被所述检测器接收。