[发明专利]检测新型冠状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及检测新型冠状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。本发明基于双重检测靶标，在同一检测体系中分别针对新型冠状病毒S基因和N基因为设计了检测引物探针组合物，并提供了包含该引物探针组合物的新型冠状病毒检测试剂盒及非疾病诊断目的的检测方法，具有敏度性高、重复性好、特异性强、检测速度快、结果客观、高通量等优点。本发明提供的试剂盒和非疾病诊断目的的检测方法不仅能够实现定性检测，还能够对待检样本的核酸浓度作出客观的、定量的检测，对检测样品的病毒含量进行准确判定，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及检测新型冠状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于冠状病毒科，β类冠状病毒，是一种有包膜、基因组为线性非节段单股正链RNA病毒。病毒粒子呈球形，直径为120-160nm，基因组全长约30kb。目前已完成多株新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的全基因组序列测定，SARS-CoV-2与SARS 基因组相似性为80％左右。

人感染新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的一般症状是发热、乏力、干咳，一些严重的临床症状有急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒、出凝血功能障碍等。因此，SARS-CoV-2的快速、可靠检测至关重要，SARS-CoV-2的快速检测不仅是SARS-CoV-2 防控所必需的，也是与其临床症状类似的SARS、MERS等呼吸系统疾病进行鉴别诊断所必需的。

目前，对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测方法有聚合酶链反应、恒温扩增芯片法、胶体金法抗体检测等。其中恒温扩增芯片法、胶体金法抗体检测的敏感性不高和特异性不强。聚合酶链反应(PCR)是一种快速检测SARS-CoV-2的方法，特别适用于筛选质量较差或降解的带有不可恢复病毒的样本。PCR技术使SARS-CoV-2的诊断能够在收样后数小时内完成，缩短了诊断时间。PCR检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的方法具有特异、敏感、快速的特点，但有费时、易污染、扩增后需电泳检测和每次检测的样品数量少等特点。

目前的SARS-CoV-2核酸检测试剂盒大多基于RT-qPCR检测技术，其检测引物探针均是针对单一靶基因设计。但是，病毒单碱基突变的频率约为10^-6，核酸序列变异程度高，易产生由于突变导致的假阴性检测结果。目前检测技术存在灵敏度低的问题，因此需要提高灵敏度消除假阴性结果。因此，亟需研发新的、高效准确的检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)方法，以用于检测疑似病例及待确诊病例中SARS-CoV-2的核酸。

发明内容

本发明的目的在于提供用于检测新型冠状病毒的引物探针组合物，以解决现有检测技术可靠性和灵敏度差的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供包含上述引物探针组合物的新型冠状病毒定性检测试剂盒。

本发明的第三个目的在于提供包含上述引物探针组合物的新型冠状病毒定量检测试剂盒。

本发明的第四个目的在于提供非诊断目的的新型冠状病毒定性检测方法。

本发明的第五个目的在于提供非诊断目的的新型冠状病毒定量检测方法。

本研究旨在建立一种更灵敏、更可靠、成本更低、速度更快的单步多重逆转录实时定量 PCR检测方法，利用刺突蛋白(S)基因和核蛋白(N)基因中的高变区，这些引物用于区分 SARS-CoV-2病毒与流感病毒和其他冠状病毒，设计用于荧光探针封闭管检测的引物。探针的合并可以识别PCR产物的特异性，并允许自动读取反应。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：