[发明专利]检测新型冠状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.检测新型冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，包括以S基因为靶标的第一引物探针和以N基因为靶标的第二引物探针；所述第一引物探针包括如SEQ ID NO：5所示的上游引物、如SEQ ID NO：6所示的下游引物和S基因检测探针，所述S基因检测探针核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团MGB；所述第二引物探针包括如SEQ ID NO：7所示的上游引物、如SEQ ID NO：8所示的下游引物和N基因检测探针，所述N基因检测探针核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，5’端标记荧光报告基团VIC，3’端标记荧光淬灭基团MGB。

2.新型冠状病毒定性检测试剂盒，其特征在于，包括RT-qPCR反应混合液，所述RT-qPCR反应混合液包含权利要求1所述的引物探针组合物。

3.新型冠状病毒定量检测试剂盒，其特征在于，包括RT-qPCR反应混合液，所述RT-qPCR反应混合液包含权利要求1所述的引物探针组合物，还包括新型冠状病毒SARS-CoV-2RNA标准品，所述RNA标准品的序列如SEQ ID NO：10所示。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，每20μL RT-qPCR反应混合液包括如下组分：250nM如SEQ ID NO：3和4所示的两种分子探针各0.5μL；900nM如SEQ ID NO：5和7所示的上游引物各0.5μL；900nM如SEQ ID NO：6和8所示的下游引物各0.5μL；4×TaqPath^TM1-Step Multiplex Master Mix 12.5μL；Nuclease-free water 3μL。

5.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照，所述阳性对照为包含如SEQ ID NO：9所示核苷酸序列的阳性质粒。

6.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照，所述阴性对照为Nuclease-free water。

7.非诊断目的的新型冠状病毒定性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待检样本RNA；

2)以待测样本的RNA为模板，采用如权利要求2～6任一项所述的试剂盒进行RT-qPCR反应；

3)结果判定：若RT-qPCR检测两个靶标的Ct值均30，则待检样品为阴性；若RT-qPCR检测两个靶标的Ct值均30，则待检样品为阳性；其他情况，待检样品为疑似样品，需要再次检测。

8.非诊断目的的新型冠状病毒定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取定量用新型冠状病毒SARS-CoV-2RNA标准品进行倍比稀释；

2)提取待检样本RNA；

3)以RNA标准品和待测样本的RNA为模板，采用如权利要求3-6任一项所述的试剂盒进行RT-qPCR反应；

4)根据已知标准品浓度，计算出各个稀释度对应的核酸拷贝数；

5)以定量用RNA标准品的核酸拷贝数的对数值为Y轴，以RT-qPCR检测的Ct值为X轴，作标准曲线；

6)将待检样品的Ct值代入标准曲线的线性回归方程中，即计算出其核酸拷贝数，即得其核酸浓度。

9.根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，采用Trizol法提取待检样本的RNA。

10.根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，RT-qPCR的反应程序为：1个循环25℃2min，53℃10min，1个循环95℃2min，40个循环95℃3second，60℃30second。