[发明专利]一种检测筛查新冠病毒N439K突变的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测筛查新冠病毒N439K突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：

两组RT-RAA扩增引物：

RT-RAA上游引物为：

5’-GAAATTAATACGACTCACTATAGGGcgctccagggcaaactggaaagattgctg-3’；

则RT-RAA下游引物为：5’-aaggtttgagattagacttcctaaacaatc-3’；

或者：

RT-RAA上游引物为：

5’-cgctccagggcaaactggaaagattgctg-3’；

则RT-RAA下游引物为：5’-aaggtttgagattagacttcctaaacaatc-3’；

三种CRISPR特异性检测的crRNA：

K1 crRNA :

5’- gauuuagacuaccccaaaaacgaaggggacuaaaacagaaucuuagaauuccaagcuauaacgc -3’；

P1 crRNA：

5’- gauuuagacuaccccaaaaacgaaggggacuaaaacagaauuuuagaauuccaagcuauaacgc-3’；

B2 crRNA:

5’-uaauuucuacuaaguguagauagaauuccaagcuauaacgc-3’；

RNA荧光探针：

5’-FAM-mArArUrGrGrCmAmArArUrGrGrCmA-BHQ1-3’；

其中，m代表2位氧甲基修饰，r代表核糖核苷酸；

DNA荧光探针：

5’ -FAM-TTATTATT-BHQ1-3’。

2.根据权利要求1所述的检测筛查新冠病毒N439K突变的试剂盒，其特征在于：还包括buffer A溶液和BufferB溶液；buffer A溶液配置方法为：向1L水中加入50mmol的Tris缓冲液，100nmol的醋酸钾，20g的聚乙二醇粉末和2mmol二硫苏糖醇；BufferB溶液为浓度为280mM的醋酸镁溶液。

3.根据权利要求1所述的检测筛查新冠病毒N439K突变的试剂盒，其特征在于：还包括：HEPES缓冲液、MgCl₂溶液、10×NEB buffer2.1缓冲液、RNase inhibitor、T7 RNApolymerase、无RNA酶水。