[发明专利]一种普卡那肽的制备方法

说明书

本发明属于多肽药物制备领域，公开了一种普卡那肽的制备方法，该方法包括以下步骤：在Fmoc‑Leu‑树脂上通过固相合成方法依次接入序列中相应的保护氨基酸，制得普卡那肽肽树脂：R₁‑Asn(R₄)‑Asp(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Cys(R₂)‑Glu(OtBu)‑Leu‑Cys(R₃)‑Val‑Asn(R₄)‑Val‑Ala‑Cys(R₂)‑Thr‑X‑Cys(R₃)‑Leu‑树脂，其中X选自：(Hmb)Gly或(Dmb)Gly；R₁选自Fmoc、Boc或H；R₂和R₃选自：A或B，A为Acm、tBu，B为Trt、Mmt，且R₂、R₃不同；R₄选自H或氨基保护基团。普卡那肽肽树脂经裂解、分步氧化得到普卡那肽粗肽。本发明工艺有效解决了固相合成过程中肽树脂收缩导致偶联困难以及缺失肽杂质的问题，大大降低了普卡那肽的合成与纯化难度，显著提高了普卡那肽的粗品纯度和收率，是一种具有广泛的实用价值和应用前景的普卡那肽制备方法。

技术领域

本发明属于多肽药物制备领域，尤其涉及一种多肽化合物普卡那肽的制备方法。

背景技术

慢性特发性便秘(CIC)和肠易激综合征伴便秘(IBS-C)是影响胃肠道的两种最常见的疾病，这些疾病的特点是大便次数减少、紧张、腹痛或不适。我国成人慢性便秘，包括CIC、功能性排便障碍及IBS-C等，患病率4％-6％。慢性便秘可继发精神心理障碍，对患者生活质量损害程度与糖尿病、心衰等慢性疾病相当。

普卡那肽(plecanatide)是由美国Synergy制药公司研发的一种鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体激动剂，于2017年1月19日被FDA批准上市，商品名为Trulance。普卡那肽为含有16个氨基酸的环状多肽，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，适用于治疗成人慢性特发性便秘，其结构式如下：

目前，普卡那肽主链的固相合成方法主要分为片段法和逐步偶联法。公开号为CN103764672A的专利申请采用片段法，通过片段之间液相缩合形成主链，该法需提前制备2个以上的片段，且片段之间液相缩合后处理繁琐，工业化生产步骤多，成本高。公开号为CN104211777A的专利申请采用逐步偶联法合成肽树脂，裂解后得线性肽，线性肽在液相中分步氧化形成两对二硫键得到普卡那肽。对于制备含有16个氨基酸的普卡那肽，逐步偶联法相对于片段法具有操作简单，易于自动化等优点。然而在实际生产时，逐步偶联过程中，当Gly¹⁴不使用保护基时，在Val⁸和Glu⁵偶联结束，肽树脂体积明显收缩，使得后序氨基酸偶联困难，得到的粗品纯度低、杂质多。公开号为CN110981939A和CN110903350A的专利申请在Gly¹⁴采用Dmb/Hmb等进行保护，同时Thr¹³侧链使用tBu保护，这样可以明显减少上述肽树脂缩聚现象。然而本发明申请人经过长期实验，意外发现，当Gly¹⁴使用Fmoc-(Hmb)Gly-OH或Fmoc-(Dmb)Gly-OH时，由于Hmb或Dmb基团本身的空间位阻较大，导致Thr¹³采用tBu保护基时偶联困难，产物中会产生较多Thr缺失肽杂质，影响产率。有文献报道肽链N端Asn侧链若用Trt保护，该保护基团对三氟乙酸相当稳定，需要长时间处理才能完全除去(Pept.Res.1992,Vol 5:145)，这样会引起其他的副反应。

因此，需要寻找一种既能降低偶联过程中的缩聚现象，又能减少Thr缺失肽的生成，同时避免Asn侧链脱水副反应，节省成本，适合工业化生产的普卡那肽制备方法。

发明内容