[发明专利]一种普卡那肽的制备方法

权利要求书

1.一种普卡那肽的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

1)将树脂固相载体和Fmoc-Leu-OH偶联，得到Fmoc-Leu-树脂；

2)通过固相合成法，在步骤1)制得的Fmoc-Leu-树脂上依次偶联序列中相应的保护氨基酸或片段，制得普卡那肽肽树脂：R₁-Asn(R₄)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(R₂)-Glu(OtBu)-Leu-Cys(R₃)-Val-Asn(R₄)-Val-Ala-Cys(R₂)-Thr-X-Cys(R₃)-Leu-树脂，其中X选自：(Hmb)Gly或(Dmb)Gly；R₁选自Fmoc、Boc或H；R₂和R₃选自A或B，A为Acm、tBu，B为Trt、Mmt，且R₂和R₃不同；R₄选自H或氨基保护基团；

3)将步骤(2)制得的普卡那肽肽树脂经裂解得到线性普卡那肽；

4)将步骤(3)制得的线性普卡那肽环化，得普卡那肽粗肽。

2.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中R₂和R₃选自Trt、Acm；R₄选自H或Trt。

3.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中树脂固相载体选自Wang树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、HMP MBHA树脂或HMP AM树脂。

4.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中Fmoc-Leu-树脂取代度为0.20-0.60mmol/g。

5.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)具体为：在Fmoc-Leu-树脂上依次偶联Fmoc-Cys(R₃)-OH、Fmoc-(Hmb)Gly-OH或Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-Thr-OH、Fmoc-Cys(R₂)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn(R₄)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(R₃)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(R₂)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Asn(R₄)-OH或Boc-Asn(R₄)-OH得到普卡那肽肽树脂。

6.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于：所述步骤2)偶联过程中使用的缩合试剂选自HBTU/HOBT/DIEA、TBTU/HOBT/DIEA或HOBt/DIC。

7.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中环化包括：

当普卡那肽肽树脂经裂解试剂裂解反应后得到肽序列中含有一对Cys带Acm保护基的线性肽时，将所述线性肽溶解，加入氧化剂，氧化反应得一环肽；将所述一环肽在碘溶液中脱除Cys上的侧链保护基Acm，同时环化得到普卡那肽粗肽。

8.根据权利要求1所述的一种普卡那肽的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中环化包括：

当普卡那肽肽树脂经裂解试剂裂解反应后得到肽序列中含有一对Cys带tBu保护基的线性肽时，将所述线性肽溶解，加入氧化剂，氧化反应得一环肽；将所述一环肽用三氯苯基硅烷、二苯亚砜氧和苯甲醚脱除Cys上的侧链保护基tBu，在相同的氧化剂体系中继续环化得到普卡那肽粗肽。