[发明专利]一种用于检测特纳综合征的引物及探针组合物、非诊断检测方法及试剂盒

说明书

本发明属于生物基因技术领域，公开了一种用于检测特纳综合征的引物及探针组合物、非诊断检测方法及试剂盒。该试剂盒是由引物及探针组合物、PCR反应液、混合液和对照品组成，在使用时仅需加入样本DNA并将反应液、PCR混合液混合即可，利用X染色体中的AR基因和Y染色体SRY基因双基因同时进行检测。本发明能够同时实现对特纳综合征和是否带有Y染色体遗传物质的检测。该试剂盒通过荧光定量PCR的方法检测，检测效率和灵敏度高，试剂成本低，具有便捷性，对操作使用人员技能要求低；该试剂盒的使用方法及检测流程中对选用的检测设备要求较低，成本付出较少，便于购置，便于大规模推广。

技术领域

本发明属于生物基因技术领域，具体涉及一种用于检测特纳综合征的引物及探针组合物、非诊断检测方法及试剂盒。

背景技术

特纳综合征(Turner syndrome,TS)，又称先天性卵巢发育不全，是一种女性染色体核型为45，XO的遗传疾病。即患者性染色体只有一条完整的X染色体，另一条X染色体完全或部分缺失，临床主要表现为生长落后和性腺发育不良。特纳综合征是女性最常见的性染色体异常疾病之一，据统计在女性胎儿中的发生率为3％，由于有较高的流产率，其中只有1％胎儿可分娩并存活，因先天性卵巢发育不全而流产的胚胎在自然流产的胚胎中占7％～10％，活产女婴发病率为1/2000～1/4000。目前全世界范围大约有150万特纳综合征患者，50％患者伴有心血管系统发育异常。主动脉狭窄是威胁患者生命的最大危险，特纳综合征患者的死亡风险比正常妇女高三倍，其寿命缩短约13年。

目前特纳综合症的检测方法主要是外周血染色体核型分析。外周血染色体核型分析需要采集受检者外周血，进而对外周血进行分离培养，以分裂中期染色体为观察对象，根据染色体的长度、着丝点位置、长短臂比例、随体的有无等特征，并借助显带技术对染色体进行分析、比较、排序和编号，根据染色体结构和数目的变异情况来进行诊断。本检测方法所需周期长，对检测人员的技术要求、经验都有非常高的要求，对于临床大范围的推广和适用有一定的困扰。10％-15％的特纳综合征患者可能保留有部分的Y染色体遗传物质。其中，以SRY基因最常见。研究发现，携带Y染色体物质患者会有男性化表现，这类患者有40％-60％的可能性发生性腺母细胞瘤。

目前，临床中只有通过FISH的方法对特纳综合征(Turner)综合征患者SRY基因的检测进行有效。但是，由于FISH方法对操作者具有非常高的技术要求，结果也需要通过荧光显微镜进行观察方可得到；此外，FISH还依赖于细胞培养对样本采集和保存均有较高的要求，不便于临床的广泛应用。此外，高通量测序也可以检测SRY基因的存在，但是其操作复杂、所用仪器价格昂贵，其主要应用于同时对多个基因进行检测，不适合单个基因的检测。

因此，建立一种快速简便易于推广的对特纳综合征进行分子遗传学确认以及是否带有人SRY基因进行检测，对于特纳综合征的辅助诊断及治疗方案的选择具有重要意义。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种用于检测特纳综合征的引物及探针组合物、非诊断检测方法及试剂盒。

本发明所采用的技术方案为：一种用于检测特纳综合征的引物及探针组合物，其特征在于，所述引物及探针组合物包括两组靶基因特异性引物对及两组探针、一组内参基因特异性引物对及探针；

所述两组靶基因包括AR基因和SRY基因；所述内参基因为CFTR基因；

所述AR基因特异性引物对及探针包括AR基因特异性上游引物核苷酸序列SEQ IDNO.1、AR基因特异性下游引物核苷酸序列SEQ ID NO.2和AR基因探针核苷酸序列SEQ IDNO.3；

所述SRY基因特异性引物对及探针包括SRY基因特异性上游引物核苷酸序列SEQID NO.4、SRY基因特异性下游引物核苷酸序列SEQ ID NO.5和SRY基因探针核苷酸序列SEQID NO.6；